CRISPRIS06

Zestaw ludzkich białek błonowych CRISPRi

• Synonim(y): Zestaw CRISPRi
• Kod UNSPSC: 12352200
• NACRES: NB.23

Właściwości

• opakowanie: pkg of 20 vials (4x50μL aliquots for each of the 5 kit components)
• Zastosowanie: CRISPR
• Warunki transportu: dry ice
• temp. przechowywania: −70°C

Opis

Opis ogólny

CRISPRi to potężne narzędzie do modulowania ekspresji genów. Technologia ta wykorzystuje dCas9 do działania jako syntetyczne czynniki transkrypcyjne poprzez rekrutację endogennych kompleksów represorów transkrypcji do promotorów genów i wzmacniaczy, co skutkuje obniżeniem transkrypcji genów. CRISPRi osiąga fenotypy LOF bez ograniczeń RNAi i CRISPR KO, chociaż CRISPRi opiera się na dostarczaniu przez lentiwirusy, technologia ta oferuje nowe możliwości inżynierii genomu. CRISPRi może być stosowana indywidualnie, aby celować w obszary genomu, które są niedostępne dla innych technologii perturbacji genów (np. regiony niekodujące) lub w połączeniu, aby odkryć sieci regulacji genów leżące u podstaw dyskretnych fenotypów. Wreszcie, zbiorcze badania przesiewowe CRISPRi można łączyć z metodami sekwencjonowania RNA pojedynczych komórek, aby umożliwić wielowymiarową charakterystykę perturbacji genów CRISPR.

Zestaw Human CRISPRi Membrane Proteins Kit zawiera 2 pod-pule 5 najlepszych gRNA na gen, a także oddzielną pod-pulę 5 dodatkowych gRNA na gen w celu zwiększenia czułości i zawiera wbudowane niecelujące kontrole. Wszystkie pule są dostosowane funkcjonalnie w oparciu o liczbę przewodników, aby zapewnić około 3 powtórzeń w zależności od linii komórkowej przy 500 gRNA na komórkę. Wektory zawierają zarówno BFP, jak i puromycynę jako markery selekcyjne oraz zoptymalizowane rusztowanie dla ekspresji i funkcji sgRNA. Każda pula biblioteki zawiera niecelujące kontrole sgRNA. Efektor UCOE KRAB-dCas9 został zaprojektowany z myślą o spójnej ekspresji i hamowaniu, umożliwiając wyciszanie genów, badanie utraty funkcji przy mniejszym ryzyku toksyczności dla komórek z powodu przerwania podwójnej nici, co sprawia, że system CRISPRi jest idealnym wyborem do perturbacji niekodujących genów, zastosowań wymagających odwracalnego, miareczkowalnego rozwiązania i niezbędnych genów.

• Poszczególne klony CRISPRi można łatwo zamówić online lub kontaktując się z lokalnym przedstawicielem handlowym.
• Niestandardowe pule do dalszych badań przesiewowych lub pule CRISPR kompatybilne z 10x Genomics są również dostępne po skontaktowaniu się z lokalnym przedstawicielem handlowym.

Aby uzyskać więcej informacji na temat badań przesiewowych z użyciem CRISPRi/a, kliknij tutaj.

Zastosowanie

• Genomika funkcjonalna / walidacja celu
• Skoncentrowane genetyczne badania przesiewowe
• Konfiguracja i optymalizacja testu przesiewowego
• Stworzenie linii komórkowych stabilnie wyrażających KRAB-dCas9
• Zatwierdzone kontrole pozytywne i negatywne

Cechy i korzyści

• Kompletny, gotowy do użycia zestaw do badań przesiewowych, w tym celowana pula przesiewowa, efektor oraz kontrola pozytywna i negatywna.
• Najlepszy w swojej klasie algorytm selekcji gRNA UCSF i zoptymalizowane rusztowanie gRNA (F+E)
• Łatwość optymalizacji: Zatwierdzona kontrola pozytywna celująca w RAB1A i kontrola niecelująca do konfiguracji testu
• UCOE KRAB-dCas9 dla spójnej ekspresji efektora w szerokiej gamie linii komórkowych
• Biblioteki dostarczane w wysokim mianie funkcjonalnym, w oparciu o analizę FAC lub CFU
• Użyj puromycyny i / lub BFP jako markerów selekcji
• Cele genowe z UCSF zorganizowane w funkcjonalną kategorię białek błonowych

Komponenty

2 Subpools with a minimum concentration of 1x10⁸ TU/mL(via FACS assay)
CRISPRIL11: CRISPRi Pool H6 Top5 Membrane Proteins
CRISPRIL12: CRISPRi Pool H6 Supp5 Membrane Proteins

2 Controls and 1 Effector Constructs with a minimum concentration of 5x10⁵ TU/mL(via FACS or CFU assay) CRISPRIE: KRAB-dCAS9 CRISPRi Construct Lentiviral Transduction Particles
CRISPRI01: CRISPRi Rab1a Control Lentiviral Transduction Particles
CRISPRI06: CRISPRi Nontargeting Control Puromycin Transduction Particles

Zasada

Potęga CRISPR w inżynierii genomowej, w połączeniu z możliwością przeprowadzania badań przesiewowych na dużą skalę, całego genomu, utraty funkcji (LOF), pozwoliła na nowe przełomy w identyfikacji szlaków genowych w oporności na leki i chorobach. CRISPR jest najczęściej wykorzystywany do tworzenia dwuniciowych przerw, które często powodują utratę funkcji genów (CRISPR-KO). Jednak pełny zakres zastosowania CRISPR wykracza poza ukierunkowane cięcie DNA. Niezależne od nukleazy zastosowania CRISPR zapewniają taką samą specyficzność celowania, ale zamiast cięcia, CRISPRi pozwala na ukierunkowaną ingerencję w funkcję genu poprzez dostarczanie transkrypcyjnych domen represorowych do określonej sekwencji docelowej przy użyciu zmodyfikowanych kompleksów dCas9 + gRNA. Znokautowanie genów jest komplementarne do CRISPR-KO i CRISPRa (aktywacja) i ma wyraźną przewagę nad istniejącymi strategiami utraty funkcji, takimi jak RNAi. Nawiązaliśmy współpracę z Uniwersytetem Kalifornijskim w San Francisco, aby zapewnić najlepsze w swojej klasie narzędzia do badań przesiewowych CRISPRi.

Informacje prawne

Umowa licencyjna na użytkowanieCRISPR

Licencje na fluorofory Lentiviral, WPRE i Evrogen

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 12 - Non Combustible Liquids