S7810-M

CpG WIZ^™ RB1 - Test PCR specyficzny dla metylacji

MSP, performed using the CpGenome DNA Modification Kit & the CpG WIZ RB1 Amplification Kit, permits sensitive detection of altered DNA.

• Kod UNSPSC: 12161503
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.31

Właściwości

• Poziom jakości: 100
• reaktywność gatunkowa: human
• producent / nazwa handlowa: CPGWIZ^™; Chemicon^®
• metody: PCR: suitable
• numer dostępu NCBI: NM_000321.2
• numer dostępu UniProt: P06400
• Zastosowanie: genomic analysis
• informacje o genach: human ... RB1(5925)

Opis

Opis ogólny

MSP, wykonywane przy użyciu zestawu do modyfikacji DNA CpGenome i zestawu do amplifikacji CpG WIZ RB1, umożliwia czułe wykrywanie zmienionego DNA. Ponieważ jest to test oparty na PCR, jest on niezwykle czuły, ułatwiając wykrywanie małej liczby zmetylowanych alleli i badanie próbek zawierających niewielkie ilości DNA. MSP pozwala również na badanie wszystkich miejsc CpG, a nie tylko tych w sekwencjach rozpoznawanych przez wrażliwe na metylację enzymy restrykcyjne. Zwiększenie liczby takich miejsc, które można ocenić, pozwala na szybkie, dokładne mapowanie wzorców metylacji w regionach CpG. Ponadto, modyfikacja bisiarczynem jest idealnie dostosowana do analizy wysp CpG, ponieważ przekształca większość cytozyny w uracyl, dzięki czemu region genomu, który jest bogaty w CG, jest mniej trudny do amplifikacji za pomocą PCR.



PCR specyficzny dla metylacji (MSP) wykorzystuje początkową reakcję wodorosiarczynu do modyfikacji DNA, a następnie amplifikację PCR "gorącego startu" ze specyficznymi starterami zaprojektowanymi w celu odróżnienia metylowanego DNA od niemetylowanego DNA. Jak pokazano na rysunku 1, w reakcji wodorosiarczynu wszystkie niemetylowane cytozyny są przekształcane w uracyle, podczas gdy 5-metylocytozyny pozostają niezmienione. W związku z tym sekwencja traktowanego DNA będzie się różnić, jeśli DNA jest pierwotnie metylowane lub niemetylowane. Primery zawarte w zestawie CpG WIZ RB1 Amplification Kit są zaprojektowane tak, aby specyficznie amplifikować każdą z sekwencji w oparciu o te chemicznie indukowane różnice. Jeśli próbka DNA była pierwotnie niemetylowana, produkt zostanie wygenerowany po PCR przy użyciu zestawu starterów U. I odwrotnie, produkt zostanie wygenerowany przy użyciu zestawu starterów M, jeśli próbka była pierwotnie metylowana.

Wiadomo, że metylacja cytozyny znajdującej się 5′ od guanozyny ma głęboki wpływ na ekspresję kilku genów eukariotycznych (1). W normalnych komórkach metylacja zachodzi głównie w regionach ubogich w CG, podczas gdy obszary bogate w CG, zwane wyspami CpG, pozostają niezmetylowane. Nieprawidłowa metylacja normalnie niezmetylowanych wysp CpG została udokumentowana jako stosunkowo częste zdarzenie w unieśmiertelnionych i transformowanych komórkach (2) i została powiązana z transkrypcyjną inaktywacją określonych genów supresorowych nowotworów u ludzi (3, 4). Gen retinoblastoma 1 (RB1) wykazuje charakterystyczną hipermetylację w wielu nowotworach złośliwych.

Wcześniej opracowane metody określania statusu metylacji cytozyny obejmują trawienie enzymami restrykcyjnymi wrażliwymi na metylację i sekwencjonowanie genomowego DNA. Obie techniki mają swoje ograniczenia: enzymy restrykcyjne mogą wykrywać miejsca metylacji tylko w obrębie rozpoznawanej przez nie sekwencji, a sekwencjonowanie jest czasochłonne. Zwiększenie czułości wykrywania metylacji wysp CpG ma potencjał do zdefiniowania funkcji genów supresorowych nowotworów i zapewnia nową strategię wczesnego wykrywania nowotworów.

PCR specyficzny dla metylacji (MSP) to nowa technologia czułego wykrywania nieprawidłowej metylacji genów przy użyciu niewielkich ilości DNA (5). Proces ten wykorzystuje początkową reakcję wodorosiarczynu w celu modyfikacji DNA, po której następuje amplifikacja PCR ze specyficznymi starterami zaprojektowanymi w celu odróżnienia metylowanego od niemetylowanego DNA. Zestaw do modyfikacji DNA CpGenome (S7820) zawiera odczynniki niezbędne do przeprowadzenia wstępnych reakcji wodorosiarczynu, podczas gdy zestaw do amplifikacji CpG WIZ RB1 zawiera odczynniki wymagane do reakcji amplifikacji PCR.

Zastosowanie

MSP, wykonywane przy użyciu zestawu do modyfikacji DNA CpGenome i zestawu do amplifikacji CpG WIZ RB1, umożliwia czułe wykrywanie zmienionego DNA.

Komponenty

The components of the CpG WIZ RB1 Amplification Kit include those required for PCR amplification after bisulfite modification of DNA samples. Sufficient reagents are provided to analyze 25 samples with appropriate controls.

U Primer Set7.5 μM each primer (25X) 35 μL (neutral cap) 90552 -15°C to -25°C

M Primer Set7.5 μM each primer (25X) 35 μL (red cap) 90553 -15°C to -25°C

W Primer Set7.5 μM each primer (25X) 35 μL (green cap) 90554 -15°C to -25°C

U control DNA0.1 μg/μL 50 μL (white cap) 90393 -15°C to -25°C

M control DNA0.1 μg/μL 50 μL (red cap) 90394 -15°C to -25°C

W control DNA0.05 μg/μL 50 μL (green cap) 90395 -15°C to -25°C

Universal 10X PCR Buffer 265 μL (blue cap) 90396 -15°C to -25°C

Informacje prawne

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

CPGWIZ is a trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 10 - Combustible liquids
• Klasa zagrożenia wodnego (WGK): WGK 2