70633
Zestaw wprowadzający do klonowania pETBlue-1 752 - Novagen
Synonim(y):
Idealnie tępe zestawy do klonowania, Wektor pETBlue-1, Wektory pETBlue, Zestaw do klonowania Novagen pETBlue-1 Perfectly Blunt Cloning Kit
Zaloguj sięWyświetlanie cen organizacyjnych i kontraktowych
About This Item
Kod UNSPSC:
41106610
NACRES:
NA.54
Polecane produkty
producent / nazwa handlowa
Novagen®
Poziom jakości
warunki przechowywania
OK to freeze
Warunki transportu
dry ice
temp. przechowywania
−70°C
Opis ogólny
Zestawy do klonowania 752 są przeznaczone do uproszczonego klonowania DNA generowanego metodą PCR przy użyciu dowolnego typu polimerazy DNA. Podejście to umożliwia wykorzystanie enzymów korekcyjnych o wysokiej wierności do amplifikacji, zmniejszając w ten sposób prawdopodobieństwo generowania mutacji w sekwencji docelowej. Ponadto, w wielu warunkach klonowanie tępe jest bardziej wydajne niż klonowanie T, najprawdopodobniej ze względu na obserwację, że wydajność dodawania pojedynczego dA przez polimerazę Taq DNA różni się znacznie w zależności od kontekstu sekwencji końców DNA, a nawet liczby wykonanych cykli PCR (Novy 1996, Clark 1998, Brownstein 1996, Magnuson, 1996, Hu 1993).
Dzięki protokołowi klonowania Perfectly Blunt można przejść od produktu PCR do umieszczenia transformantów na płytkach w mniej niż godzinę przy minimalnym nakładzie pracy. Gotowy produkt PCR jest przekształcany w tępą, fosforylowaną formę w 15-minutowej reakcji przy użyciu wstępnie zmieszanych odczynników. Po 5-minutowym etapie inaktywacji cieplnej, przetworzony insert jest łączony z gotowym do użycia wektorem i ligowany w zoptymalizowanej 15-minutowej reakcji. Ekskluzywna 8-minutowa procedura transformacji przy użyciu wysoce wydajnych kompetentnych komórek NovaBlue Singles (nr kat. 70181) generuje rekombinowane kolonie, które można łatwo wizualizować za pomocą niebiesko-białego badania przesiewowego.
Należy pamiętać, że metoda Perfectly Blunt nie ogranicza się do klonowania produktów PCR; zestawy te nadają się również do klonowania fragmentów restrykcyjnych, cDNA lub ściętego DNA przy użyciu tych samych protokołów.
W zestawach do klonowania 752 dostępnych jest siedem różnych wektorów. Wybór wektorów obejmuje te zaprojektowane do ogólnego klonowania, sekwencjonowania, optymalnej transkrypcji/translacji in vitro i optymalnej ekspresji białek w E. coli. Każdy wektor jest dostępny w zestawie zawierającym odczynniki wystarczające na 10, 20 lub 40 reakcji.
Zestawy "tylko wektorowe" są również dostępne w rozmiarach 20 i 40 reakcji bez ligazy i komórek kompetentnych. Aby uzyskać komórki kompetentne o wyższej wydajności, patrz także pSTBlue-1 Perfectly Blunt Giga Cloning Kit (nr kat. 71229).
Wektor pETBlue-1 został zaprojektowany do identyfikacji rekombinantów za pomocą tradycyjnego niebiesko-białego badania przesiewowego, jednocześnie umożliwiając ekspresję genów docelowych w oparciu o promotor T7lac. Badanie przesiewowe jest niezależne od ekspresji, ponieważ promotor ekspresji T7lac znajduje się w przeciwnej orientacji w stosunku do promotora E. coli, który pośredniczy w niebiesko-białym badaniu przesiewowym. pETBlue-1 ułatwia ekspresję natywnych białek bez fuzji i umożliwia wygodne subklonowanie genów docelowych już połączonych z istniejącymi znacznikami wykrywania i oczyszczania. Miejsce klonowania EcoR V jest odpowiednio oddalone od miejsca wiązania rybosomu E. coli. Wstawki muszą kodować kodon startowy ATG na ich 5′ końcu, jeśli pożądana jest ekspresja. Sekwencja jest numerowana od pierwszej zasady sekwencji promotora T7.
Oprócz systemów pETBlue, które zawierają niecięte plazmidy, wektory pETBlue są dostępne w formatach gotowych do wstawienia produktów PCR. Dostępne są dwa rodzaje zestawów: AccepTor Vector Kits i 752 Cloning Kits. AccepTor Vector Kit umożliwia bezpośrednią insercję DNA zawierającego pojedyncze zwisy 3′-dA, takie jak te amplifikowane za pomocą polimeraz DNA bez proofreadingu (np. NovaTaq DNA Polymerase), podczas gdy Perfectly Blunt Cloning Kits są przeznaczone do klonowania insertów posiadających dowolny typ końca DNA.
Dzięki protokołowi klonowania Perfectly Blunt można przejść od produktu PCR do umieszczenia transformantów na płytkach w mniej niż godzinę przy minimalnym nakładzie pracy. Gotowy produkt PCR jest przekształcany w tępą, fosforylowaną formę w 15-minutowej reakcji przy użyciu wstępnie zmieszanych odczynników. Po 5-minutowym etapie inaktywacji cieplnej, przetworzony insert jest łączony z gotowym do użycia wektorem i ligowany w zoptymalizowanej 15-minutowej reakcji. Ekskluzywna 8-minutowa procedura transformacji przy użyciu wysoce wydajnych kompetentnych komórek NovaBlue Singles (nr kat. 70181) generuje rekombinowane kolonie, które można łatwo wizualizować za pomocą niebiesko-białego badania przesiewowego.
Należy pamiętać, że metoda Perfectly Blunt nie ogranicza się do klonowania produktów PCR; zestawy te nadają się również do klonowania fragmentów restrykcyjnych, cDNA lub ściętego DNA przy użyciu tych samych protokołów.
W zestawach do klonowania 752 dostępnych jest siedem różnych wektorów. Wybór wektorów obejmuje te zaprojektowane do ogólnego klonowania, sekwencjonowania, optymalnej transkrypcji/translacji in vitro i optymalnej ekspresji białek w E. coli. Każdy wektor jest dostępny w zestawie zawierającym odczynniki wystarczające na 10, 20 lub 40 reakcji.
Zestawy "tylko wektorowe" są również dostępne w rozmiarach 20 i 40 reakcji bez ligazy i komórek kompetentnych. Aby uzyskać komórki kompetentne o wyższej wydajności, patrz także pSTBlue-1 Perfectly Blunt Giga Cloning Kit (nr kat. 71229).
Wektor pETBlue-1 został zaprojektowany do identyfikacji rekombinantów za pomocą tradycyjnego niebiesko-białego badania przesiewowego, jednocześnie umożliwiając ekspresję genów docelowych w oparciu o promotor T7lac. Badanie przesiewowe jest niezależne od ekspresji, ponieważ promotor ekspresji T7lac znajduje się w przeciwnej orientacji w stosunku do promotora E. coli, który pośredniczy w niebiesko-białym badaniu przesiewowym. pETBlue-1 ułatwia ekspresję natywnych białek bez fuzji i umożliwia wygodne subklonowanie genów docelowych już połączonych z istniejącymi znacznikami wykrywania i oczyszczania. Miejsce klonowania EcoR V jest odpowiednio oddalone od miejsca wiązania rybosomu E. coli. Wstawki muszą kodować kodon startowy ATG na ich 5′ końcu, jeśli pożądana jest ekspresja. Sekwencja jest numerowana od pierwszej zasady sekwencji promotora T7.
Oprócz systemów pETBlue, które zawierają niecięte plazmidy, wektory pETBlue są dostępne w formatach gotowych do wstawienia produktów PCR. Dostępne są dwa rodzaje zestawów: AccepTor Vector Kits i 752 Cloning Kits. AccepTor Vector Kit umożliwia bezpośrednią insercję DNA zawierającego pojedyncze zwisy 3′-dA, takie jak te amplifikowane za pomocą polimeraz DNA bez proofreadingu (np. NovaTaq DNA Polymerase), podczas gdy Perfectly Blunt Cloning Kits są przeznaczone do klonowania insertów posiadających dowolny typ końca DNA.
Cechy i korzyści
- Brak enzymów restrykcyjnych lub specjalnych starterów
- Kompatybilność z dowolną polimerazą DNA
- Niezależny od dodatku 3ʹ-dA lub kontekstu sekwencji końców DNA
- Niebieski/biały screening z siedmioma różnymi wektorami, w tym wektorami ekspresyjnymi pETBlue
- Prosty protokół zajmuje mniej niż jedną godzinę* od produktu PCR do posiewu transformantów
Ostrzeżenie
Toksyczność: Wiele wartości toksyczności, patrz MSDS
Inne uwagi
Novy, R.E., et al. 1996. inNovations 6, 7. Clark, J.M. 1988. Nucleic Acids Res. 16, 9677. Brownstein, J.M., et al. 1996. BioTechniques 20, 1004. Magnuson, V.L., et al. 1996. BioTechniques 21, 700. Hu, G. 1993. DNA and Cell Biology 12, 763.
Informacje prawne
NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Perfectly Blunt is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
Certyfikaty analizy (CoA)
Poszukaj Certyfikaty analizy (CoA), wpisując numer partii/serii produktów. Numery serii i partii można znaleźć na etykiecie produktu po słowach „seria” lub „partia”.
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.
Nasz zespół naukowców ma doświadczenie we wszystkich obszarach badań, w tym w naukach przyrodniczych, materiałoznawstwie, syntezie chemicznej, chromatografii, analityce i wielu innych dziedzinach.
Skontaktuj się z zespołem ds. pomocy technicznej