Nucleases (DNases and RNases)

제한 엔도뉴클레아제

DNA 및 RNA 분해를 위한 뉴클레아제 

자사의 뉴클레아제는 절단 특이성뿐만 아니라 최적 pH와 같은 특성에 따라 달라지며, 이는 연구자가 실험적 필요에 가장 적합한 소화 효소를 선택할 수 있게 합니다. 예를 들어, 포유류 공급원의 데옥시리보뉴클레아제 I은 페니실리움 시트리늄(Penicillium citrinum)에서 말단 5' P1이 있는 산물을 생성하며, 이는 단일 가닥 DNA 및 RNA는 분해하지만 이중 가닥 DNA는 분해하지 않습니다. 리보뉴클레아제 A는 RNA 오염 단백질 검체 또는 플라스미드 DNA 제제를 가수분해합니다. 이러한 효소 대부분은 분자생물학에서 추가적인 용도가 있습니다. 예를 들어, DNase I은 표지 염기의 결합을 허용하기 위해 DNA "닉(nick)"을 허용합니다. RNase A는 RNase 보호 분석에서 도구로 사용되며 특정 mRNA 과다성을 측정합니다.

데옥시리보뉴클레아제 I 및 데옥시리보뉴클레아제 II DNase 효소

데옥시리보뉴클레아제 I은 이중 및 단일 가닥 DNA의 핵내분해 절단을 촉진하여 5'-포스포디뉴클레오티드 및 5'-포스포올리고뉴클레오티드 최종 산물을 생성합니다. 가수 분해 산물은 5'-포스페이트 모노뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오티드 복합 혼합물입니다. DNase I은 마그네슘 존재 하에 각 DNA 가닥을 독립적으로 공격하고 절단 부위는 무작위입니다. DNase I은 망간(II) 존재 하에 거의 동일한 위치에서 각 DNA 가닥을 절단합니다. 프로토콜 대부분은 DNase I과 함께 마그네슘 이온을 사용하지만, 특정한 목적을 위해 망간이 사용됩니다. 또한, 데옥시리보뉴클레아제 II는 이중 및 단일 가닥 DNA의 핵내분해 절단을 촉진하여 뉴클레오시드 3'-포스페이트 및 3'-포스포올리고뉴클레오티드 최종 산물을 수득합니다. 활성을 위한 pH 범위는 4.0에서 6.5이며, pH 6.5에서 약 15%만 존재하며, 최적의 pH는 5.0입니다. 효소의 최적 안정성은 pH 5 ~ 5.5에서 나타나며, 30°C 및 pH 8.5에서 급속도로 비활성화됩니다. 자사는 광범위한 DNase 효소 제품군을 제공하여 다양한 검체 유형 및 애플리케이션을 지원합니다. 자사의 일부 DNase에는 현저히 낮은 농도의 RNase 또는 프로테아제가 포함되어 있어 감압 하에 동결건조되었는지 또는 액체 형태인지에 관계없이 원치 않는 분해로부터 시료를 보호합니다.

리보뉴클레아제 A, 리보뉴클레아제 H 및 리보뉴클레아제 T₁ RNase 효소

리보뉴클레아제 A는 RNA의 핵내분해 절단을 촉진하여 Cp 또는 Up으로 끝나는 뉴클레오시드 3'-포스페이트 및 3'-포스포올리고뉴클레오티드를 수득합니다. RNase A 활성화제는 칼륨 및 나트륨 염을 포함합니다. 효소가 15 ~ 70°C에서 활성을 나타내기는 하지만, 활성을 위한 최적 온도는 60°C입니다. 최적 pH는 7.6이며, 활성 범위는 6 ~ 10입니다. 최고 활성은 단일 가닥 RNA에서 나타납니다. Rnase A는 매우 안정한 효소이고 최대 100°C 온도를 견딜 수 있습니다. 100°C에서 RNase A는 pH 2.0 및 4.5 사이에서 가장 안정적입니다. 리보뉴클레아제 H는 RNA:DNA 이중체에서 RNA의 포스포디에스테르 결합을 특이적으로 가수분해하여 3'-하이드록실 및 5'-포스페이트 말단이 있는 산물을 생성합니다. 이는 DNA-RNA 하이브리드(상보적 DNA 가닥에 수소 결합된 RNA)의 RNA 성분만 분해합니다.

또한, 리보뉴클레아제 T₁은 RNA의 2단계 핵내분해 절단을 촉진하여 주로 Gp로 끝나는 뉴클레오시드 3'-포스페이트 및 3'-포스포올리고뉴클레오티드를 수득합니다. 이 반응에서 구아니딘 리보뉴클레오티드의 3'-포스페이트기와 인접한 뉴클레오티드의 5'-히드록실 사이에 절단이 발생합니다. 초기 산물은 상응하는 3'-뉴클레오시드 포스페이트로 가수 분해되는 2':3' 고리형 포스페이트 뉴클레오시드입니다. 용액에서는 열(pH 6에서 10분 동안 100°C) 및 산에 내성이 있지만, 알칼리성 용액(>pH 9)에서는 불안정합니다. 효소에 의해 촉진되는 반응은 반응 혼합물을 100°C로 가열하여 멈출 수 없다는 점에 유의해야 합니다. 자사는 광범위한 RNase 효소 제품군을 제공하여, 다양한 시료 유형 및 애플리케이션을 지원합니다. 자사의 일부 RNase에는 현저히 낮은 농도의 프로테아제가 포함되어 있어 감압 하에 동결건조되었는지 또는 액체 형태인지에 관계없이 원치 않는 절단으로부터 시료를 보호합니다 .