단백질 정량
단백질 정량 및 단백질 분석은 샘플 내의 단백질 농도를 정확히 측정하기 위해 중요합니다. UV 흡수 분석, 시약-기반 분석 및 면역분석 기술을 포함하는 여러 단백질 정량화법이 있습니다. 각각의 이러한 단백질 정량화 기술은 고유한 혜택을 가지며 해당 분석의 적정성은 분석을 위해 이용가능한 샘플 유형 및/또는 용적에 의존합니다. 예를 들면, 일부 염료-기반 분석은 완충액 전처리에서 발견되는 화학물을 방해할 수 있으므로 대안적인 분석이 보다 적절할 수 있습니다. 과학자들은 샘플을 위한 최선의 옵션을 결정하기 위해 각 분석의 제한사항을 고려해야할 필요가 있습니다.
UV 흡광도 분석
단백질 농도를 측정하기 위해 자외선(UV) 흡광을 사용하는 것은 상대적으로 간단한 단백질 정량 분석입니다. 방향족 측쇄를 가진 아미노산(트립토판, 타로신, 등)은 280 nm에서 독특한 UV 흡광도를 가진 단백질을 제공합니다. 이러한 아미노산은 280 nm에서 UV를 흡수하므로, 이 특정 파장에서의 흡광도를 분광광도계를 통해 얻을 수 있어 샘플에서 단백질 농도를 추정할 수 있습니다. 이러한 상대적으로 신속한 분석은 실험실에서 빈번히 사용되며 단백질 농도 추정을 위해 Warburg-Christian 방법이 일반적으로 수행됩니다. 하지만, 샘플의 비단백질 성분이 흡광도 측정을 간섭할 수 있기 때문에 단백질 농도를 위한 UV 흡광도 이용은 높은 변이성을 줄 수 있습니다. 또한, 샘플에 다른 단백질이 혼합되어 있어 아미노산 조성의 차이점으로 인한 흡광도 판독에 변동을 유발할 수 있습니다.
관련 기술 문서
- Learn more about Mass Spectrometry or MS including what it is, what it is used for and how it works.
- To standardize a procedure for the determination of protein by modified Lowry.
- A wide variety of products for traditional protein quantitation techniques such as BCA and Bradford. Also, products for alternative assays such as Lowry, Micro Pyrogallol and FluoroProfile are also available for total protein determination.
- Learn how total protein quantitation with an infrared spectrometer may be a more accurate and universal alternative to Bradford, BCA, or UV-based methods.
- Troubleshooting 2-D DIGE Results
- 모두 보기 (23)
관련 프로토콜
- A standard procedure for the quantitative determination of total protein concentration of a solution by the BCA method.
- To determine protein content, the Warburg-Christian method refers to measuring protein samples at 280 nm using a spectrophotometer.
- 2-D Quant Kit from Cytiva is designed to accurately determine protein concentrations in samples for electrophoresis.
- Assay protocol for the colorimetric/fluorometric detection of L-Amino Acids in biological samples using the L-Amino Acid assay kit
- Key Steps in the MILLIPLEX® Assay Protocol for the Analysis of Soluble Biomarkers
- 모두 보기 (17)
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시약-기반 분석
시약-기반 분석은 UV 흡광법에서 관찰된 호환성 문제를 극복할 수 있습니다. 단백질 정량화를 위한 시약-기반 분석의 예에는 바이신코니닉산(BCA), Lowry 및 Bradford 분석법과 같은 발색법을 활용하는 분석이 있습니다. BCA 분석법 및 Lowry 분석법 모두 구리-단백질 복합체의 형성을 포함합니다. 이들은 민갑한 분석법이며 Bradford 분석법 보다 변이성이 적습니다. 그러나, Bradford 분석법은 BCA 및 Lowry 분석법과 다르게 빠르고 수행하기 용이하며 특정 환원제와 호환됩니다.
면역분석법
일부 분석법은 샘플에 여러 단백질이 존재하거나 정량이 검출 한도 미만인 경우 정확한 단백질 정량화를 지원하지 않을 수 있습니다. 다양한 검출법을 이용하는 강력한 면역분석 기술은 여러 샘플 유형으로부터 정확하게 단백질을 정량화하는 대안적인 방법을 제공합니다. 예를 들면, 다중 분석법은 과학자들이 샘플에서 여러 단백질을 동시에 정량화할 수 있도록 합니다. 또한, 단일 분자 계수 기술은 단백질을 페토그램 수준까지 측정할 수 있어 소량의 샘플에서 저수준 단백질의 동정 및 정량화를 돕습니다. 이러한 기술은 이용하는 연구 애플리케이션은 특정 질환 상태를 잘 이해하도록 건강한 조직이나 질병 진행과 연관된 조직에서의 생체표지자 측정을 포함합니다.
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