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서열분석

DNA, RNA 가닥에서 핵산의 조성 및 순서를 결정하는 능력은 질병 연구와 모든 유기체에 대한 더 나은 이해에 필수적인 현대 유전학 및 수많은 분야를 이해하기 위한 지대한 의미를 갖습니다. 핵산 서열분석 능력은 유기체의 유전자 코드를 해독하는 데 유용할 뿐만 아니라 연구자에게 추가 분자 기술과 결합하여 DNA 서열을 쉽게 조작하고 서열분석을 통해 이러한 변화를 확인할 수 있는 강력한 도구를 제공합니다. 코딩 DNA가 단백질에 대한 코딩된 정보로 기능하기 때문에 연구자들은 이제 매우 다양한 기능적 요소를 포함하고 동등하게 많은 수의 중요한 연구 질문에 답하도록 널리 사용되는 재조합 단백질을 맞춤 설계할 수 있습니다. 추가적인 전체 게놈 서열분석 시약 및 지침을 위해, 차세대 서열분석 리소스를 방문하십시오.

Sanger 서열분석

초기에 분석 화학 기법으로 핵산 조성을 결정할 수 있었습니다. 그러나 Fred Sanger와 공동 연구자들은 초기에 방사성 표지된 소화된 절편과 2차원 분획을 사용하여 최초의 완전한 핵산 서열 일부를 제공하는 방법을 개발했습니다. 이 분야의 발전은 수십 년 동안 계속되었으며, 각각의 개선이 서열분석된 단백질 및 게놈 라이브러리에 추가되었습니다. 이러한 개선 사항에는 겔 전기영동에 이어 모세관 전기영동을 사용하여 길이에 따른 뉴클레오티드 분리를 포함합니다. 또한, 형광 표지된 뉴클레오티드 및 각 핵산 절편의 자동화된 컴퓨터 분석의 통합은 완전히 새로운 현대적인 Sanger 서열분석 기법을 정의합니다.

DNA 서열분석 기법

이 기술이 시작된 이후로 DNA 서열분석 기법이 계속 개선되었지만, 현대 DNA 서열분석 플랫폼에서는 몇 가지 기본 구성 요소가 여전히 필요하고 사용됩니다. DNA 전처리는 일반적으로 숙주 유기체로부터 DNA의 분리 및 정제를 포함합니다. 유리 DNA 염기, DNA 프라이머, 형광 태그를 포함하는 변형된 DNA 염기(터미네이터 염기) 및 DNA 중합효소를 포함한 추가 중요 구성요소가 단일 용기에 함께 추가됩니다. 일련의 가열 및 냉각 단계를 통해 이러한 모든 구성 요소를 포함하는 용기는 관심 있는 전장 DNA 서열에 관련된 소형 DNA 서열 라이브러리를 생성하며, 각각은 형광 말단 표지된 터미네이터 염기로 끝납니다. 형광 말단이 표지된 뉴클레오타이드를 포함하는 새로운 DNA 가닥은 길이에 따라서 분리되어 모세관을 통과하고 크기별로 배열됩니다. 형광 염기를 여기하기 위해 레이저를 사용하고 카메라가 해당 신호를 포착합니다. 마지막으로, 컴퓨터는 일반적으로 수집된 정보를 전체 길이의 DNA 서열로 조합하기 위해 사용됩니다.


관련 기술 문서

관련 프로토콜

  • Sanger 염기서열분석의 단계 또는 사슬종료법에 대해 알아보고 DNA 염기서열분석이 작동하는 방법, 연구 시 Sanger 염기서열분석 결과를 정확하게 판독하는 방법에 대해서 자세히 알아보십시오.
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