タンパク質相互作用研究におけるDuolink^®の使用

このビデオでは、タンパク質相互作用やその修飾を1回の実験で検出、定量、細胞局在性を得ることできるシンプルでわかりやすい手順を紹介しています。

• スライドまたはマイクロプレート上に保存した細胞や組織は、活性化状態や一時的な相互作用を維持するために固定します。
• ターゲットの検出が確認されている一次抗体を添加後、PLAプローブを結合させます。
• PLAプローブのオリゴヌクレオチドアームのハイブリダイゼーションは、ターゲットタンパク質のエピトープが近接している（40 nm以内）場合のみ、ローリングサークル増幅(RCA)のテンプレートを作成します。
• RCA産物を増幅し、検出プローブで標識します。
• 得られたスポットは、標準的な顕微鏡により検出、視覚化することが可能です。
• 画像は解析ソフトを用いることによって定量的に解析でき、平均およびシングルセルデータ解析の両方が容易になります。