HPLCによる尿中のピロキシカムおよび2-アミノピリジンの分析、Discovery® HS F5、SPE処理、Discovery® DSC-MCAX使用
CONDITIONS
sample preparation
SPE (Solid Phase Extraction)
sample/matrix
human urine spiked with piroxicam (4 μg/mL) and 2-aminopyridine (10 μg/mL)
SPE tube/cartridge
Discovery DSC-MCAX, 100 mg/3 mL (52783-U)
condition
1 mL methanol; 1 mL 10 mM potassium phosphate, pH 3
sample addition
1 mL
washing
1 mL 10 mM potassium phosphate, pH 3; 1 mL methanol
elution
1 mL 5% ammonium hydroxide in methanol
eluate post-treatment
evaporate to dryness with nitrogen at room temperature, reconstitute in 1 mL mobile phase
column
Discovery HS F5, 15 cm x 4.6 mm I.D., 5 μm particles (567516-U)
mobile phase
[A] 10 mM potassium phosphate, pH 6: [B] acetonitrile (85:15, A:B)
flow rate
2 mL/min
column temp.
25 °C
detector
UV, 220 nm
injection
10 μL
詳細
アプリケーション
サンプルの前処理:
ピロキシカムと2-アミノピリジン(ピロキシカムの極性代謝物)を、ヒト尿にそれぞれ4 μg/mL、10 μg/mL加えました。その尿サンプルを、pH 3、10 mMのリン酸カリウムで1:1に希釈しました。
条件 SPEチューブ(メタノール1 mL、10 mM リン酸カリウム1 mL、pH 3)
ロード 希釈混入された尿サンプル1 mL
洗浄 10 mMリン酸カリウム1 mL、pH 3、メタノール1 mL
溶出 5%水酸化アンモニウム入りメタノール1 mL
エバポレート N2乾燥、室温
再構成 LC移動相1 mL
2つの競合するウェイト/ハードウェアディメンション当量ベッドの混合モード陽イオン交換相を用いて、上記手法を繰り返してください。
法的情報
Discovery is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany