C7657

コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

Type XI, 2-5 FALGPA units/mg solid, ≥800 CDU/mg solid

• 別名: クロストリジオペプチダーゼA
• CAS番号: 9001-12-1
• Enzyme Commission number: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-582-9
• MDL番号: MFCD00130830
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.54

特性

• 由来生物: Clostridium histolyticum
• 品質水準: 200
• 形状: powder
• 比活性: ≥800 CDU/mg solid; 2-5 FALGPA units/mg solid
• 分子量: 68-130 kDa
• 溶解性: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
• アプリケーション: diagnostic assay manufacturing
• 保管温度: −20°C

詳細

アプリケーション

この製品は、膵管腺癌（PDAC）細胞株の単離および膵線維芽細胞の組織培養に使用されています。

クロストリジオペプチダーゼAは、コラーゲンの断片化後のMALDI-TOF（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型）質量分析（MS）に基づいて少量のコラーゲンを評価するための定量法の記述に関する研究に使用されています。

生物化学的／生理学的作用

組織からの効果的な細胞の遊離には、コラゲナーゼ酵素と中性プロテアーゼの作用を必要とします。コラゲナーゼは、酵素1モルあたり4グラムのカルシウム（Ca²⁺）原子によって活性化されます。培養濾液は、分子量68～130 kDaの間の、少なくとも7つの異なるプロテアーゼを含んでいると思われます。至適pHは6.3～8.8です。本酵素は、通常、組織サンプル中の結合成分を消化し、個々の細胞を遊離させるために使用されます。コラゲナーゼ処理により、幾つかの細胞が死ぬことがあります。通常、0.1～5 mg/mLの範囲にある濃度は、断片化に使用されます。反応時間は15分～数時間で、細胞死を起こし過ぎることなく満足のいく細胞解離効率が得られます。カルシウムとBSAを含有するKrebs Ringer緩衝液が好ましく、活性にはZn²⁺が必要です。

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

品質

クロストリパイン活性、非特異的中性プロテア-ゼ活性、およびトリプシン活性も有しています。

単位の定義

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

調製ノート

保存溶液は、37℃、pH 7.4で、0.36 mMの塩化カルシウム（TESCA）を含有する50 mMのTES緩衝液（TESCA）に0.05～0.1 mg/mLのコラゲナーゼを溶解することにより調製できます。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H334
• 注意書き: P261 - P284 - P501
• 危険有害性の分類: Resp. Sens. 1
• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): Not applicable
• 引火点(℃): Not applicable
• 個人用保護具 (PPE): dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves