サンプル精製

分析用サンプルの調製にあたってラボで採用されている最も一般的な精製法は主に次のとおりです。

透析

透析は、サンプルから塩やその他の低分子量分子を除去するために使用される精製法です。また、サンプルの緩衝液成分の交換にも使用されます。透析は大量の緩衝液が必要な受動的技法です。

緩衝液の交換・脱塩

脱塩は、塩やその他の低分子量の汚染物質をサンプルから除去するシンプルな方法です。また、さまざまなクロマトグラフィー手順前後の緩衝液交換でも使用されるほか、反応を終了させるために試薬を迅速に除去する場合にも使用されます。

分別沈殿

分別沈殿は、少量のサンプルから粗い不純物を除去するために使用されます。沈殿法は、溶解度差の原理でフラクションを分離します。タンパク質の種類によって疎水性の度合いが異なるため、塩分濃度が高くなるとタンパク質間の疎水性相互作用が強まり、沈殿が発生します。

抽出

抽出によるサンプル前処理には、複雑なサンプルや大量のサンプルからの対象分析物の分離が含まれます。このプロセスでは、HPLCやGCのカラムを阻害する可能性のある妨害サンプル成分を除去します。また、分析物の濃度が100倍～5,000倍になるため、検出感度が大幅に向上します。抽出は、選択的かつ特異的なサンプル調製の一環として、より信頼性の高いクロマトグラフィー分析に役立ちます。抽出の種類には、液液抽出、固相抽出（SPE）、固相マイクロ抽出（SPME）があります。

アフィニティークロマトグラフィー

アフィニティークロマトグラフィーは、タンパク質と、クロマトグラフィーマトリックスに結合した特定のリガンドの間の可逆的な相互作用に基づいてタンパク質を分離します。この手法は選択性が高く、大容量のタンパク質精製が可能です。 アフィニティークロマトグラフィーは、対象となるタンパク質に適したリガンドがあれば、いつでも使用できます。

アフィニティークロマトグラフィーによる精製には、捕捉と溶出のステップがあります。捕集相では、クロマトグラフィーマトリックスに固定化された相補的なリガンドに対象タンパク質が特異的かつ可逆的に結合します。その目的は、対象製品を分離、濃縮、安定化させ、その効力と活性を維持することです。マトリックスを洗浄して未結合物質を除去した後、条件を対象タンパク質が溶出しやすいものに変更し、結合した対象タンパク質を回収します。溶出は、競合するリガンドを用いて特異的に行われるか、pH、イオン強度、極性を変更して非特異的に行われます。溶出することで、対象タンパク質を精製、濃縮した状態で回収できます。