R6513

Ribonuklease A aus Rinderpankreas

for molecular biology, ≥70 Kunitz units/mg protein, lyophilized

• Synonym(e): Pankreatische Ribonuklease, RNAsea, RNase A, Ribonuclease I
• CAS-Nummer: 9001-99-4
• EC-Nummer: 3.1.27.5 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-646-6
• MDL-Nummer: MFCD00132181
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.53

Eigenschaften

• Qualität: for molecular biology
• Qualitätsniveau: 300
• Form: lyophilized
• Spezifische Aktivität: ≥70 Kunitz units/mg protein
• Mol-Gew.: 13.7 kDa; ~13,700
• Fremdaktivität: Exonuclease and endonuclease, none detected; NICKase and DNase, none detected
• Lagertemp.: −20°C
• InChI: 1S/C9H14N4O3/c10-2-1-8(14)13-7(9(15)16)3-6-4-11-5-12-6/h4-5,7H,1-3,10H2,(H,11,12)(H,13,14)(H,15,16)
• InChIKey: CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

RNase A ist ein einkettiges Polypeptid mit 124 Aminosäuren, die durch vier Disulfidbrücken verbunden sind. Im Gegensatz zur RNase B ist RNase A kein Glycoprotein. RNase A kann durch Alkylierung von His¹² bzw. His¹¹⁹, die sich an der aktiven Stelle des Enzyms befinden, gehemmt werden. Aktivatoren von RNase A sind Kalium- und Natriumsalze.

RNase A ist eine Endoribonuklease, die am 3′-OH-Phosphat eines Pyrimidin-Nukleotids angreift. Die Sequenz pG-pG-pC-pA-pG wird gespalten und ergibt pG-pG-pCp und A-pG. Das Enzym hat bei einzelsträngiger RNA die höchste Aktivität.

RNase A, Ribonuklease A, ist eine Endoribonuklease, die Phosphodiester-Bindungen an RNA-Einzelsträngen nach Pyrimidin-Nukleotiden spaltet. Sie greift am 3′-Phosphatende an (z. B. wird die Sequenz pG-pG-pC-pA-pG gespalten und ergibt pG-pG-pCp und A-pG). Das Enzym hat bei einzelsträngiger RNA die höchste Aktivität. RNase A ist ein einkettiges Polypeptid mit 4 Disulfidbrücken. Im Gegensatz zur RNase B ist sie kein Glycoprotein. Ribonukleasen hydrolysieren die DNA nicht, da die DNA keine 2′-OH-Gruppen enthält, die für die Bildung zyklischer Zwischenprodukte von höchster Bedeutung sind. RNase A kann auch RNA aus Proteinproben hydrolysieren. RNase A kann durch Alkylierung des His12 und His119 gehemmt und durch Kalium- und Natriumsalze aktiviert werden. RNAse wird durch vorhandene Schwermetallionen gehemmt. RNase wird außerdem kompetitiv durch DNA gehemmt.

Anwendung

• RNase A wird zur Entfernung von RNA aus DNA-Plasmidpräparationen, aus Präparationen von genomischer DNA und aus Proteinproben verwendet.
• RNase A wird ferner in der RNA-Sequenzanalyse und in Schutzassays eingesetzt.
• RNase A wurde als Hilfsmittel für das computerunterstützte Wirkstoffdesign verwendet.
• RNase A unterstützt die Analyse von RNA-Sequenzen.
• RNase A hydrolysiert in Proteinproben enthaltene RNA.
• Die Aufreinigung von DNA wird durch Rnase A unterstützt.

Ribonuclease A aus Rinderpankreas wird verwendet:

• bei der Reinigung von Plasmid-DNA
• zum Verdauen und Vermeiden der Färbung doppelsträngiger RNA beim Färben von Kernen
• zum Immunperoxidase- und Immunfluoreszenznachweis
• zur Behandlung von Zellen vor der Durchflusszytometrie
• als Bestandteil des Post-Hybridisierungspuffers zum Waschen von FFPE-Gewebeschnitten nach der In-situ-Hybridisierung
• zur Behandlung von Zellen während der Präparation von Extrakten äußerer Membranproteine
• RNase-Schutzassay
• Entfernung unspezifisch gebundener RNA
• Analyse der RNA-Sequenzen
• Hydrolyse von RNA in Proteinproben

Leistungsmerkmale und Vorteile

Unsere stabile Ribonuklease A, RNase A eignet sich für die Entfernung von RNA, die RNA-Sequenzierung und die Aufreinigunn von DNA.

Hinweis zur Analyse

Proteinbestimmung nach E.

Sonstige Hinweise

Aktivatoren von RNase A sind Kalium- und Natriumsalze. RNase A kann durch Alkylierung von His12 oder His119 gehemmt werden.

Eine wichtige Anwendung von RNase A ist die Entfernung von RNA aus Plasmid-DNA-Präparationen. Für diese Anwendung wird DNase-freie RNase A bei einer Endkonzentration von 10 μg/ml verwendet.

Das Kochen von Stammlösungen dieses RNase A-Produkts zur Inaktivierung von DNase-Resten ist nicht erforderlich und kann zur Ausfällung von RNase und möglicherweise einem Verlust der Enzymaktivität führen. Wenn eine RNase A-Lösung bei neutralem pH-Wert erhitzt wird, findet eine Ausfällung statt. Bei Erhitzung bei einem niedrigeren pH-Wert findet aufgrund vorhandener Proteinverunreinigungen eine gewisse Ausfällung statt.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H334
• P-Sätze: P261 - P284 - P501
• Gefahreneinstufungen: Resp. Sens. 1
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)