RNAINH-RO

Protettore inibitore di RNasi

• Sinonimo/i: Inibitore RNasi, protettore
• Codice UNSPSC: 41181611

Proprietà

• Saggio: >95% (SDS-PAGE)
• Livello qualitativo: 100
• PM: ~50 kDa
• Confezionamento: pkg of 10,000 U (03335402001 [5 x 2,000 U]); pkg of 2,000 U (03335399001)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• Parametri: 25-55 °C optimum reaction temp.
• Intervallo di pH: 5.0-9.0
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

Contenuto
Inibitore di RNasi Protector (40 U/μL) in tampone di stoccaggio: HEPES-KOH 20 mM, KCl 50 mM, ditio-treitolo 8 mM, glicerolo 50% (v/v), pH circa 7,6 (a +4 °C).

Protector RNase Inhibitor inactivates a wide spectrum of RNases, including

• RNasi A
• RNase B
• RNase T2

Thus, Protector RNase Inhibitor can help prevent RNase degradation in any application where RNases could cause problems. For instance, it can:

• proteggere l′RNA virale nella replicazione del virus in vitro
• inibire le RNasi durante l′isolamento e la purificazione dell′RNA
• be used in RNase protection assays
• favorire la preparazione di anticorpi esenti da RNasi

Nota: l′inibitore di RNasi Protector non interferisce con gli enzimi comunemente impiegati per preparare o analizzare l′RNA.

Specificità

L′inibitore di RNasi Protector non inibisce di sicuro RNasi T1 e RNasi 1.
L′inibitore di RNasi Protector (20 U/20 μL di reazione) inibisce la RNasi A fino a 1 ng, RNasi B fino a 160 pg e la RNasi T2 fino a 0,03 U/μL nel volume di reazione.
La RNasi H non è inibita da Protector Inibitore di RNasi.
Inattivazione termica: > 65 °C

Applicazioni

Protector RNase Inhibitor may be used to:

• proteggere l′mRNA in reazioni di sintesi di cDNA, nella RT-PCR (in termociclatori convenzionali e sistemi qPCR), per es. con strumenti LightCycler^®, nel sistema di trascrizione/traduzione in vitro, nel saggio di protezione dalla RNasi, nella sintesi dell′RNA in vitro
• proteggere l′RNA virale nella replicazione del virus in vitro
• inibire le RNasi durante l′isolamento e la purificazione dell′RNA
• favorire la preparazione di anticorpi esenti da RNasi
• sintetizzare sonde a RNA per ibridazione in situ

È utile in qualsiasi applicazione in cui le RNasi potrebbero essere un problema.

Caratteristiche e vantaggi

• Affidarsi ad un inibitoredi RNasi termicamente stabile: Protector Inibitore di RNasi permane stabile anche quando si usano trascriptasi inverse stabili termicamente come la trascriptasi inversa Transcriptor.
• Trarre vantaggio da una ampia gamma di condizioni di reazione: Il Protector Inibitore di RNasi è attivo da pH 5,0 a 9,0 e a temperature fra +25 °C e +55 °C (attività parziale ancora misurabile a +60 °C).
• Eliminare interferenze in diverse applicazioni di analisi RNA: Mantenere un′efficienza invariata anche arrivando ad una concentrazione 16 volte maggiore di quella standard.
• Esigere una preparazione della massima purezza: Ogni lotto è testato funzionalmente usando tecniche come la RT-PCR quantitativa per assicurare l′assenza di endonucleasi, ribonucleasi o attività di incisione del DNA secondo le procedure di controllo di qualità attuali.

Qualità

Ogni lotto di inibitore di RNasi Protector viene testato funzionalmente con il kit Titan One Tube RT-PCR e il kit LightCycler DPD. L′inibitore di RNasi Protector viene anche testato per la presenza di attività contaminanti come descritto qui di seguito.
Tampone del saggio: Tris-HCl 50 mM, MgCl₂ 10 mM, EDTA 0,1 mM, β-mercaptoetanolo 7 mM; pH 7,5 (+37 °C).
Assenza di endonucleasi: 1 μg di frammenti EcoR I/Hind III* di λDNA viene incubato con inibitore di Rasi Protector in 50 μl del tampone del saggio a +37°C per 1 ora. La quantità di inibitore che non causa alcuna variazione nelle bande di DNA è specificata sotto "Endo".
Assenza di attività di incisione del DNA: 1 μg di DNA di pBR322 superavvolto viene incubato con inibitore di RNasi Protector in 50 μL di tampone del saggio a +37°C per un′ora. La quantità di inibitore che non causa alcun rilassamento nel DNA superavvolto è definita sotto "Nick. Act.".
Assenza di ribonucleasi (1): 5 μg di RNA di MS2 vengono incubati con l′inibitore di RNasi Protector per un′ora a +37°C in un volume finale di 50 μL. La quantità di inibitore che non causa alcuna degradazione dell′RNA di MS2 è specificata sotto "RNasi 1".
Assenza di ribonucleasi (2): 5 μg di RNA di MS2 vengono incubati con l′inibitore di RNasi Protector per un′ora a +37°C, poi per 10 minuti a +65°C in un volume finale di 50 μL. La quantità di inibitore che non causa alcuna degradazione dell′RNA di MS2 è specificata sotto "RNasi 2".

Definizione di unità

Una unità di inibitore di RNasi Protector è definita come la quantità di proteina necessaria per inibire il 50% dell′attività di 5 ng di RNasi A.

Saggio dell′attività: l′attività si misura secondo Blackburn come la capacità di inibire l′idrolisi dell′acido citidin-2′ : 3′-monofosforico ciclico. Nelle condizioni del saggio, 200 U di inibitore delle RNasi Protector inibiscono il 50% dell′attività di 1 μg di RNasi A.

Attività per volume: 40 U/μL

Nota sulla preparazione

Concentrazione di lavoro:

• Da 5 a 10 U in RT-PCR One step
• da 25 a 50 U in RT-PCR Two step
• 20 U per la trascrizione in vitro

Si possono usare concentrazioni più alte di Protector inibitore di RNasi in RT-PCR se si sospetta che la contaminazione da RNasi renda certi campioni difficili da amplificare. L′inibitore non interferisce con la reazione. (In un sistema di prova anche una concentrazione
16 volte più alta di inibitore non ha interferito con la RT-PCR in tempo reale.)

Altre note

Specifiche del prodotto:
Fonte: Polmone di ratto: prodotto ricombinante in E. coli
Punto isoelettrico: pH 4,5
Temperatura a cui l′inibitore di RNasi Protector è attivo: Da 25 °C a +55 °C; attività parziale ancora rilevabile a +60°C
Inattivazione: In condizioni spinte di denaturazione (temperature oltre +65 °C), l′inibitore si disattiva.
Carica microbica <50 cfu/mL
Contenuto DNA: <100 pg/mg

Solo per ricerche life science. Non usare in procedure diagnostiche.

Note legali

AVVISO ALL'ACQUIRENTE: ESCLUSIONE DI LICENZA
Questo prodotto è ottimizzato per l′uso nella reazione a catena della polimerasi (PCR) coperta da brevetti di proprietà di F. Hoffmann-La Roche Ltd ("Roche"). In seguito all′acquisto di questo prodotto, all′acquirente non viene conferita espressamente o implicitamente nessuna licenza ai sensi di questi brevetti all′impiego della PCR. Una licenza all′impiego della PCR per determinate attività di ricerca e sviluppo accompagna l′acquisto di alcuni reagenti Roche, Applied Biosystems o di altri fornitori autorizzati se usati con un termociclatore autorizzato o è comunque disponibile presso Applied Biosystems. Gli impieghi diagnostici richiedono una licenza da parte di Roche. Per ulteriori informazioni sull′acquisto di licenze, contattare il Responsabile delle Licenze, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California, 94404, USA.

LightCycler is a registered trademark of Roche

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): does not flash
• Punto d’infiammabilità (°C): does not flash