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Kit per marcatura RNA DIG (SP6/T7)

sufficient for 2 x 10 labeling reactions, kit of 1 (12 components), suitable for hybridization, suitable for Southern blotting

• Sinonimo/i: labeling di RNA, sistema DIG
• Codice UNSPSC: 41105500

Proprietà

• impiego: sufficient for 2 x 10 labeling reactions
• Livello qualitativo: 100
• Confezionamento: kit of 1 (12 components)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• Caratteristiche più verdi: Designing Safer Chemicals; Learn more about the Principles of Green Chemistry.
• sustainability: Greener Alternative Product
• tecniche: Northern blotting: suitable; Southern blotting: suitable; hybridization: suitable
• Categoria alternativa più verde: , Aligned
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

Tempo del saggio: 145 minuti
Materiali del campione

• DNA plasmidico linearizzato
• Prodotto della PCR

Principio
Il kit per la marcatura dell′RNA con DIG produce sonde a RNA a singolo filamento, marcate con DIG, di lunghezza nota. La RNA polimerasi SP6 o T7 trascrive le sonde in vitro dallo stampo di DNA (in presenza di digossigenina-UTP).
Marcatura dell′RNA tramite trascrizione in vitro
Il DNA da trascrivere viene clonato nel sito polylinker di vettori di trascrizione appropriati (per es., pSPT 18 o 19), che contengono promotori per le RNA polimerasi SP6 e/o T7. Il DNA di stampo adiacente viene linearizzato in corrispondenza di un sito adatto e con le RNA polimerasi si producono trascritti “run-off”. DIG-UTP viene incorporato nel trascritto. Ogni 20-25° nucleotide dell′RNA di nuova sintesi vi è un DIG-UTP. Dal momento che nella reazione di trascrizione standard la concentrazione dei nucleotidi non diviene un fattore limitante, la reazione può generare grandi quantità di RNA marcato.

Il nostro impegno è fornire prodotti alternativi verdi che aderiscano ad almeno uno dei 12 principi della chimica verde. Questo prodotto è concepito come un prodotto chimico più sicuro. Il sistema DIG ha dimostrato di essere un′alternativa, sensibile ed efficace in rapporto al costo, all′uso della radioattività per la marcatura e il rilevamento degli acidi nucleici. Sono disponibili numerose pubblicazioni che dimostrano la versatilità del sistema DIG, per cui l′uso della radiomarcatura non è più l′unica opzione per la marcatura del DNA per l′ibridazione.

Kit per la marcatura dell′RNA con digossigenina-UTP tramite trascrizione in vitro con le polimerasi SP6 e T7. Con questo metodo si producono sonde a RNA a singola elica di lunghezza nota da usare in una serie di tecniche di ibridazione.

Specificità

Sensibilità e specificità
Le sonde a RNA marcate con DIG sono in grado di rilevare geni in singola copia in appena 1 μg di DNA di mammifero in un saggio che rispetti le seguenti condizioni: Miscela di ibridazione contenente 20-100 ng di sonda marcata per mL, rilevamento della sonda legata con anti-DIG-AP e visualizzazione con il substrato luminescente CDP-Star.
Inattivazione termica: Arrestare la reazione con l′aggiunta di 2 μL di EDTA 0,2 M (pH 8.0).

Applicazioni

Per la marcatura dell′RNA con DIG-11-UTP tramite trascrizione in vitro con le polimerasi SP6 e T7. I trascritti “run off” marcati con DIG sono sintetizzati con elevata efficienza e possono essere usati in una serie di tecniche di ibridazione:

• Northern blot
• Southern blot
• Ibridazioni in situ
• Plaque lift o colony lift
• Esperimenti di protezione dell′RNAsi

Grazie a sistemi di rilevamento molto specifici e sensibili, è possibile usare le sonde marcate con DIG per rilevare geni in singola copia su 1 μg di DNA umano totale.
Nota: Il legame tra DIG e UTP è resistente agli alcali, dunque l′RNA marcato con DIG può essere frammentato con un trattamento alcalino. Una lieve riduzione della dimensione della sonda a RNA marcata con DIG può renderla più adatta a certe applicazioni di ibridazione in situ.

Confezionamento

1 kit comprende 12 componenti.

Qualità

Principio del test: Lo stampo di DNA da trascrivere viene clonato nel sito polylinker di vettori di trascrizione appropriati che contengono promotori per le RNA polimerasi SP6 e/o T7. Dopo la linearizzazione in un sito idoneo, l′RNA viene trascritto in presenza di DIG-UTP. In condizioni standard, da 1 μg di stampo si trascrivono circa 10 μg di RNA marcato con DIG a tutta lunghezza.

Altre note

Da utilizzare solo per ricerca nelle scienze naturali. Non usare in procedure diagnostiche.

Solo come componenti del kit

• pSPT18 DNA 0.25 mg/ml
• pSPT19 DNA 0.25 mg/ml
• Control DNA 1, pSPT18-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
• Control DNA 2, pSPT19-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
• DIG-labeled Control RNA, DIG-labeled "antisense" neo RNA 100 ng/µl
• Unlabeled Control RNA, neo poly (A) "sense" RNA 200 µg/ml
• NTP Labeling Mixture 10x concentrated
Transcription Buffer 10x concentrated
DNase I, RNase-free 10 U/µl
Protector RNase Inhibitor 20 U/µl
SP6 RNA Polymerase 20 U/µl
T7 RNA Polymerase 20 U/µl

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Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS07
• Avvertenze: Warning
• Indicazioni di pericolo: H302,H317,H319
• Consigli di prudenza: P261 - P264 - P280 - P333 + P313 - P337 + P313 - P362 + P364
• Classi di pericolo: Acute Tox. 4 Oral - Eye Irrit. 2 - Skin Sens. 1
• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 2
• Punto d’infiammabilità (°F): does not flash
• Punto d’infiammabilità (°C): does not flash