MAB3420

Anticorpo anti-Tau-1, clone PC1C6

clone PC1C6, Chemicon^®, from mouse

• Sinonimo/i: Anti-Tau Antibody
• Codice UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Proprietà

• Origine biologica: mouse
• Livello qualitativo: 100
• Forma dell’anticorpo: purified antibody
• Clone: PC1C6, monoclonal
• Reattività contro le specie: human, rat, bovine
• Confezionamento: antibody small pack of 25 μg
• Produttore/marchio commerciale: Chemicon^®
• tecniche: immunofluorescence: suitable; immunohistochemistry: suitable; western blot: suitable
• Isotipo: IgG2a
• N° accesso NCBI: NM_005910.3; NM_016834.2; NM_016835.2; NM_016841.2
• N° accesso UniProt: P10636
• Condizioni di spedizione: dry ice
• Temperatura di conservazione: −20°C
• modifica post-traduzionali bersaglio: unmodified

Descrizione

Descrizione generale

Tau, una proteina che si lega ai microtubuli negli assoni in crescita stabilizzandoli, risulta essere iperfosforilata nei filamenti elicoidali appaiati (PHF), il principale componente fibroso delle lesioni neurofibrillari associate alla malattia di Alzheimer. Si ritiene che l'iperfosforilazione di Tau sia l'evento critico che determina l'assemblaggio dei PHF. Sono state identificate sei isoforme della proteina Tau, tutte fosforilate dalla chinasi glicogeno-sintasi 3 (GSK3) Localizzazione cellulare e subcellulare: in situ, l'anticorpo anti-Tau-1 presenta specificità stringente per gli assoni neuronali. L'anticorpo non colora né i corpi cellulari né i dendriti neuronali, né tanto meno altri tipi cellulari (4). Tuttavia, questa specificità intracellulare in vivo non viene mantenuta in coltura: anti-Tau-1 colora infatti assone, corpo cellulare e dendriti di neuroni ippocampali di ratto cresciuti in coltura (5). Inizialmente si pensava che la specificità di anti-Tau-1 rispecchiasse un pattern di espressione di Tau confinato agli assoni. Successivamente si comprese che questa specificità dipende invece dallo stato di fosforilazione. Nei campioni defosforilati (trattati con fosfatasi alcalina), anti-Tau-1 colora gli astrociti, le cellule gliali perineuronali e assone, corpo cellulare e dendriti dei neuroni, mentre nei campioni non trattati questo anticorpo colora solo gli assoni (6). (Probabilmente l'epitopo riconosciuto da anti-Tau-1 si trova in o vicino a un sito fosforilato).

Specificità

L'anticorpo anti-Tau-1, clone PC1C6 si lega a tutte le specie elettroforetiche note di tau in cervello di uomo, ratto e bovini (SDS-PAGE monodimensionale). Tuttavia, con il clone PC1C6 vi sono problemi riguardo la fosforilazione in quanto sembra che l'anticorpo riconosca solo i siti delle serine defosforilate 195, 198, 199 e 202 {Szendrei, et al 1993; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi-cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=7680727}. Per ulteriori informazioni sulla mappatura con il clone PC1C6 si veda anche Billingsley & Kincaid, 1997 Biochem J 323:577-591.

Immunogeno

Proteine associate ai microtubuli di origine bovina purificate e denaturate.

Applicazioni

Categoria di ricerca
Neuroscienze

L'anticorpo anti-Tau-1, clone PC1C6, riconosce la proteina Tau-1 e l'uso di questo prodotto in applicazioni di IH & WB è citato da oltre 65 pubblicazioni.

Sottocategoria di ricerca
Malattie neurodegenerative

Western blotting: preparazioni di microtubuli di cervello bovino purificati mediante due cicli di assemblaggio e disassemblaggio (9) sono state dissolte in tampone per campioni per SDS-PAGE. In ogni corsia di un gel SDS-PAGE a gradiente (4-20%) sono stati caricati 5 microgrammi di preparazione di microtubuli, affiancando un marcatore di peso molecolare (14,3-200 kDa). Dopo separazione per elettroforesi, è stato eseguito il blotting trasferendo le proteine su una membrana di nitrocellulosa. Utilizzando circa 5 ng/mL di anticorpo anti-Tau-1 è stata rivelata la presenza della proteina Tau sotto forma di una serie di 5 bande (52-68 kDa).

Immunofluorescenza: una diluizione 1:1.000 di questo anticorpo ha permesso di rivelare la proteina Tau in neuroni primari di topo. (Basnet, N., et al. (2018). Nat. Cell Biol. 20(10); 1172-1180.

Immunoistochimica: alla concentrazione di 5 μg/mL questo anticorpo ha colorato gli assoni di tessuti primari; tuttavia, in coltura l'espressione di Tau non è circoscritta ai soli assoni.

Sarà cura dell′utente finale stabilire le diluizioni di lavoro ottimali.

Protocollo di immunoistochimica

Defosforilazione delle sezioni tissutali (opzionale)

Se si desidera utilizzare l'anticorpo anti-Tau-1 per colorare i grovigli neurofibrillari nel tessuto cerebrale di Alzheimer, si raccomanda di effettuare la defosforilazione con fosfatasi alcalina. Questo trattamento modifica la distribuzione della colorazione con anti-Tau-1, che sarà presente quindi nel corpo cellulare, nei dendriti e nell'assone dei neuroni. Nei campioni non trattati, anti-Tau-1 colora solo gli assoni.

1. Incubare le sezioni tissutali a +32 °C per 2,5 ore, sotto agitazione costante, nella seguente soluzione: Tris-HCl 100 mM, pH 8,0; fosfatasi alcalina 130 unità/mL, PMSF 1 mM, pepstatina 10 μg/mL e leupeptina 10 μg/mL.

2. Risciacquare le sezioni per due volte, 3 min. ogni risciacquo, con Tris-HCl 100 mM, pH 8,0.

Colorazione con anti-Tau-1

1. Bloccare i legami aspecifici incubando le sezioni in PBS contenente siero animale normale 1% (v/v) e Triton X-100 0,03% (p/v). Il siero animale deve originare dalla stessa specie dell'anticorpo secondario.

2. Risciacquare con PBS per 3 volte, 3 min. ogni risciacquo.

3. Incubare le sezioni con circa 5 μg/mL di anti-Tau-1 diluito in PBS contenente siero animale normale 1% (v/).

4. Lavare con PBS, cambiando la soluzione per 3 volte e lasciandola in contatto per 3 min.

5. Effettuare la rivelazione utilizzando un sistema standard basato su un anticorpo secondario (10-13).

Descrizione del bersaglio

5 bande (52–68 kDa)

Linkage

Sostituisce: AB1512

Stato fisico

Formato: purificato

Purificazione con proteina A

Tampone fosfato 0,02 M, pH 7,6, NaCl 0,35 M e azoturo di sodio 0,1%

Stoccaggio e stabilità

A -20°C si conserva per 1 anno dalla data di spedizione. Suddividere in aliquote per evitare di scongelare e ricongelare ripetutamente. Per massimizzare la quantità di prodotto recuperato, centrifugare il contenitore originale una volta scongelato prima di togliere il tappo.

Risultati analitici

Controllo
Tessuto cerebrale di Alzheimer (per la colorazione dei grovigli neurofibrillari in questo tipo di tessuto si raccomanda di effettuare la defosforilazione con fosfatasi alcalina) o cellule di glioblastoma umano T98G.

Altre note

Concentrazione: per la concentrazione specifica del lotto, fare riferimento al Certificato di Analisi.

Note legali

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 2
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable