C9891

Colagenase

Type IA, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid, For general use

• Sinônimo(s): Clostridiopeptidase A
• Número CAS: 9001-12-1
• Número da licença da enzima: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-582-9
• Número MDL: MFCD00130830
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• Nível de qualidade: 200
• Formulário: essentially salt-free, lyophilized powder
• atividade específica: ≥125 CDU/mg solid; 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• peso molecular: 68-130 kDa
• técnica(s): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• solubilidade: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing
• Condições de expedição: wet ice
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Aplicação

A enzima também foi usada juntamente com outras proteases para a desagregação de tecidos de tumor humano, rim de camundongo, cérebro humano e de epitélio pulmonar. Ela também é útil em estudos de perfusão de fígado e rim, digestão de pâncreas, isolamento de células não parenquimais de fígado de rato e hepatócitos. A enzima da Sigma foi usada para digerir colágeno tipo I de ossos bovinos trabeculares e corticais. Também foi usada como controle positivo no ensaio FALGPA com células de Streptococci do grupo B.

Adequada para uso na preparação de suspensão de célula única para sequenciamento.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A colagenase é ativada por quatro gramas de átomos de cálcio por mol de enzima. Ela é inibida por ácido etileno glicol-bis(beta-aminoetil éter)-N, N, N′,N′-tetracético, beta-mercaptoetanol, glutationa, ácido tioglicólico e 8-hidroxiquinolina.

A liberação eficaz de células do tecido requer a ação de enzimas colagenase e da protease neutra. A colagenase é ativada por quatro átomos-grama de cálcio (Ca²⁺) por mol de enzima. Acredita-se que o filtrado da cultura contenha pelo menos 7 proteases diferentes, que variam em peso molecular de 68-130 kDa. O pH ideal varia de 6,3-8,8. A enzima é usada tipicamente para digerir os componentes conjuntivos em amostras de tecido para liberar células individuais. O tratamento com colagenase pode provocar a morte de algumas células. Tipicamente, concentrações na faixa de 0,1 a 5 mg/ml são usadas para digestão. A duração da reação varia de 15 minutos a várias horas e para uma eficácia satisfatória da dissociação celular que não cause morte celular excessiva. O tampão de Krebs-Ringer com cálcio e BSA é preferível e Zn²⁺ é necessário para atividade. A enzima reconhece a sequência -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-, onde X geralmente é um aminoácido neutro. Ácido etilenoglicol-bis(β-aminoetil éter)-N,N,N′,N′-tetra-acético (EGTA)4; β-mercaptoetanol; glutationa (reduzida); ácido tioglicólico, sódico; 2,2′-dipiridil; 8-hidroxiquinolina, cisteína são inibidores conhecidos da atividade enzimática.

Atenção

Na forma fornecida, este produto é estável por um ano a -20 °C. Não há perda de FALGPA ou atividade de proteases em 30 dias a 37 °C, 50 °C e -20 °C. Soluções de colagenase bruta são estáveis se congeladas rapidamente em alíquotas (em concentração de 10 mg/ml) e mantidas congeladas a -20 °C. Ciclos adicionais de congelamento e descongelamento danificarão a solução. O produto retém 100% de atividade ao longo de 7 horas se mantido em gelo.

Definição da unidade

Uma unidade de digestão de colágeno (CDU) libera peptídeos de colágeno do tendão de Aquiles bovino que equivalem em cor de ninidrina a 1,0 μmol de leucina em 5 horas em pH 7,4 a 37 °C na presença de íons de cálcio. Uma unidade de hidrólise de FALGPA hidrolisa 1,0 μmol de furilacriloil-Leu-Gli-Pro-Ala por min a 25 °C. Uma unidade de protease neutra hidrolisa caseína para produzir cor equivalente a 1,0 μmol de tirosina por 5 h em pH 7,5 a 37 °C. Uma unidade de clostripaína hidrolisa 1,0 μmol de BAEE por min em pH 7,6 a 25 °C na presença de DTT.

Nota de preparo

Este produto é equivalente à primeira fração de sulfato de amônio de 40% de Mandl, I., et al., J. Clin. Invest., 32, 1323 (1953). As soluções são preparadas tipicamente em concentração de 1-2 mg/ml em tampão TESCA (contendo 50 mM de TES, 0,36 mM de cloreto de cálcio, pH 7,4, a 37 °C).

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable
• Equipamento de proteção individual: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves