UDGHL-RO

Uracil DNA glicosilase, termolábil

recombinant from marine bacterium BMTU 3346

• Sinônimo(s): PCR, UDG
• Número da licença da enzima: 3.2.2.15 (BRENDA, IUBMB)
• Código UNSPSC: 41106300

Propriedades

• fonte biológica: bacterial (marine bacterium BMTU 3346)
• Nível de qualidade: 100
• recombinante: expressed in E. coli
• Formulário: solution
• embalagem: pkg of 100 U (11775367001); pkg of 500 U (11775375001)
• fabricante/nome comercial: Roche
• concentração: 1000 U/mL
• técnica(s): activity assay: suitable
• cor: colorless
• pH ideal: 8.3-8.9
• solubilidade: water: soluble
• adequação: suitable for enzyme test
• aplicação(ões): life science and biopharma
• atividade externa: DNA decontamination:, present ( >= 10 e5 copies ); RNases with MS- II- RNA ≤10 units, none detected; Unspec.nucleases w. lambda-DNA 20 units, none detected; Unspec.nucleases w.M13mp9ss-DNA ≤20 units, none detected; Unspec.nucleases w.pBR 322-DNA ≤20 units, none detected
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

A uracil DNA glicosilase termolábil contém a enzima com o mesmo nome encontrada na bactéria marinha BTMU 3346. Como a UNG de E. coli, ela hidrolisa as ligações uracil-glicosídicas em DNA de fita simples ou dupla, removendo a uracila e criando sítios abásicos sensíveis a álcalis no DNA. Os sítios abásicos podem ser hidrolisados por tratamento com endonucleases, calor ou álcalis. Dependendo de como o DNA é preparado, a uracil DNA glicosilase pode ser usada para realizar clivagem de U-DNA geral ou especificamente de um sítio ou fita. Esta enzima tem menor termoestabilidade e, portanto, é mais fácil de inativar.

Características enzimáticas
A enzima BMTU 3346 é inativada mais rapidamente (2 minutos a +95 °C) que a enzima correspondentes de E. coli (10 minutos a +95 °C). Foi relatado também que a UNG de E. coli continua parcialmente ativa, levando à degeneração do produto de PCR que contém dU. Por outro lado, a UNG termolábil não degrada produtos de dU-PCR por pelo menos várias horas de incubação a +2 a +8 ºC. Portanto, não é necessário congelar o produto de PCR imediatamente após a amplificação ou manter a mistura de reação a -70 °C.

Especificidade

• A uracil DNA glicosilase hidrolisa ligações uracil-glicosídicas em sítios de U-DNA em DNA de fita simples e dupla, removendo a uracila e criando sítios abásicos sensíveis a álcalis no DNA.
• A enzima é ativa em DNA de fita simples e DNA de fita dupla.
• A uracil DNA glicosilase é inativa em RNA e DNA nativo sem uracila.
• Como a uracil DNA glicosilase não exige íons metálicos, ela é totalmente ativa na presença de EDTA.

Inativação térmica: 95 °C por 2 min

Aplicação

A uracil DNA glicosilase pode ser usada para clivar DNA em qualquer sítio em que um resíduo de desoxiuridilato tenha sido incorporado. Por causa da termolabilidade da uracil DNA glicosilase, termolábil, a principal aplicação desta enzima é a prevenção de transferência de contaminação em PCR. Diferentemente da enzima de E. coli; usar este preparado de UNG não requer que o produto de PCR seja congelado imediatamente após a amplificação ou que a mistura de reação seja mantida a +70 °C.

Observação importante: Para técnicas altamente sensíveis, como PCR em tempo real, recomendamos nossa uracil DNA glicosilase LightCycler^®, que é otimizada para esta aplicação.

Características e benefícios

• Evita a transferência de contaminação em PCR.
• Aumenta a eficiência de procedimentos de mutagênese direcionada para sítios.
• Marca sondas de oligonucleotídeos.
• Realiza a inativação mais rapidamente que a enzima correspondente de E. coli devido à menor termoestabilidade da enzima.
• Ausência de degradação de produtos de dU-PCR por pelo menos várias horas de incubação a +2 a +8 °C.

Conteúdo
A enzima é fornecida em solução de 1 U/μl em tampão de armazenamento.

Qualidade

Teste de função: A atividade de prevenção de transferência é avaliada adicionando cerca de 105 dU contendo moldes antes da reação de amplificação. Após o tratamento com UNG, não é possível detectar nenhum produto de amplificação.
A enzima não contém nenhuma exo ou endonuclease e não tem atividade de RNase, segundo os procedimentos atuais de controle de qualidade.

Definição da unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de uracil DNA glicosilase necessária para degradar completamente 1 μg de DNA purificado de fita simples contendo uracila (bacteriófago M13, cultivado em E. coli CJ236 com as mutações dut-ung-) a +37 °C em 60 minutos.
Uma unidade de Lindahl é definida como a quantidade de enzima necessária para liberar 1 mol de uracila a +37 °C em 1 minuto. Uma unidade de Lindahl é comparável a 520.000 unidades com base na nossa definição de unidade.

Atividade por volume: 1 U/μl

Outras notas

Para uso laboratorial geral.

Informações legais

LightCycler is a registered trademark of Roche

Informações de segurança

• Frases de perigo: H412
• Declarações de precaução: P273 - P501
• Classificações de perigo: Aquatic Chronic 3
• Código de classe de armazenamento: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 2
• Ponto de fulgor (°F): does not flash
• Ponto de fulgor (°C): does not flash