RNAINH-RO
Roche
O inibidor de RNase Protector
Sinônimo(s):
inibidor de rnase, protetor
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About This Item
Código UNSPSC:
41181611
NACRES:
NA.21
Produtos recomendados
Ensaio
>95% (SDS-PAGE)
Nível de qualidade
peso molecular
~50 kDa
embalagem
pkg of 10,000 U (03335402001 [5 x 2,000 U])
pkg of 2,000 U (03335399001)
fabricante/nome comercial
Roche
Parâmetros
25-55 °C optimum reaction temp.
faixa de pH
5.0-9.0
temperatura de armazenamento
−20°C
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Descrição geral
Conteúdo
Inibidor de RNase Protector (40 U/μl) em tampão de armazenamento: 20 mM de HEPES-KOH, 50 mM de KCl, 8 mM de ditiotreitol, 50% de glicerol (v/v), pH aproximadamente 7,6 (+4 °C).
Inibidor de RNase Protector (40 U/μl) em tampão de armazenamento: 20 mM de HEPES-KOH, 50 mM de KCl, 8 mM de ditiotreitol, 50% de glicerol (v/v), pH aproximadamente 7,6 (+4 °C).
O inibidor de RNase Protector inativa uma ampla gama de RNases, incluindo
- RNase A
- RNase B
- RNase T2
- proteger o mRNA em reações de síntese de cDNA, RT-PCR (em termocicladores convencionais e sistemas de qPCR) ou reações de transcrição/tradução in vitro
- proteger o RNA viral durante a replicação viral in vitro
- inibir RNases durante o isolamento e purificação de RNA
- ser usado em ensaios de proteção contra RNases
- ajudar a preparar anticorpos sem RNases
Especificidade
O Protector RNase Inhibitor (20 U/ 20 μl de reação) inibe a RNase A até 1 ng, RNase B até 160 pg e RNase T2 até 0,03 U/μl de volume de reação.
RNase H não é inibido pelo Protector RNase Inhibitor.
Inativação por calor: > 65 °C
RNase H não é inibido pelo Protector RNase Inhibitor.
Inativação por calor: > 65 °C
Aplicação
O inibidor de RNase Protector pode ser usado para:
- Proteger o mRNA em reações de síntese de cDNA, RT-PCR (em termocicladores convencionais e sistemas de qPCR), p. ex., com os instrumentos LightCycler®, sistema de transcrição/tradução in vitro, ensaio de proteção contra RNase, síntese de RNA in vitro
- Proteger o RNA viral durante a replicação viral in vitro
- Inibir RNases durante o isolamento e purificação de RNA
- Ajudar a preparar anticorpos sem RNases
- Sintetizar sondas de RNA para hibridização in situ
Características e benefícios
- Depende de um inibidor de RNase termoestável: O inibidor de RNase Protector permanece estável, mesmo quando se usa transcriptases reversas termoestáveis, como a transcriptase reversa Transcriptor.
- Beneficie-se de uma ampla gama de condições de reação: O inibidor de RNase Protector é ativo em pH 5,0 a 9,0 e em temperaturas entre +25 °C a +55 °C (a atividade parcial ainda é mensurável a +60 °C).
- Elimina interferência em diferentes aplicações de análise de RNA: Mantém o desempenho mesmo quando adicionado em concentração 16 vezes maior que a concentração padrão.
- Insista em uma purificação altamente purificada: Cada lote é testado quanto à função, usando técnicas como RT-PRC quantitativo para garantir a ausência de endonucleases, ribonucleases ou atividade de corte, segundo os procedimentos de controle de qualidade atuais.
Qualidade
Cada lote de inibidor de RNase Protector é testado quanto à função com o kit de RT-PCR Titan One Tube e o kit LightCycler DPD. O inibidor de RNase Protector também é testado quanto a atividades contaminantes, conforme descrito abaixo.
Tampão de teste: 50 mM de Tris-HCl, 10 mM de MgCl2, 0,1 mM de EDTA, 7 mM de β-mercaptoetanol; pH 7,5 (+37 °C).
Ausência de endonucleases: 1 μg de fragmentos de DNA EcoR I/Hind III* λé incubado com inibidor de RNase Protector em 50 μl de tampão de teste a +37 °C por 1 hora. A quantidade de inibidor que causa nenhuma alteração no padrão de formação de bandas é referida como “Endo”.
Ausência de atividade de cortes (nicking): 1 μg de DNA pBR322 superenrolado é incubado com inibidor de RNase Protector em 50 μl de tampão de teste a +37 °C por 1 hora. A quantidade de inibidor que não causa nenhum afrouxamento do DNA superenrolado é referida como “Nick. Act.".
Ausência de ribonuclease (1): 5 μg de RNA MS2 são incubados com inibidor de RNase Protector por 1 hora a +37 °C em um volume final de 50 μl. A quantidade de inibidor que não causa nenhuma degradação do RNA MS2 é referida como “RNase 1”.
Ausência de ribonuclease (2): 5 μg de RNA MS2 são incubados com inibidor de RNase Protector por 1 hora a +37 °C, depois de 10 minutos a +65 ºC em um volume final de 50 μl. A quantidade de inibidor que causa nenhuma degradação do RNA MS2 é referida como “RNase 2”.
Tampão de teste: 50 mM de Tris-HCl, 10 mM de MgCl2, 0,1 mM de EDTA, 7 mM de β-mercaptoetanol; pH 7,5 (+37 °C).
Ausência de endonucleases: 1 μg de fragmentos de DNA EcoR I/Hind III* λé incubado com inibidor de RNase Protector em 50 μl de tampão de teste a +37 °C por 1 hora. A quantidade de inibidor que causa nenhuma alteração no padrão de formação de bandas é referida como “Endo”.
Ausência de atividade de cortes (nicking): 1 μg de DNA pBR322 superenrolado é incubado com inibidor de RNase Protector em 50 μl de tampão de teste a +37 °C por 1 hora. A quantidade de inibidor que não causa nenhum afrouxamento do DNA superenrolado é referida como “Nick. Act.".
Ausência de ribonuclease (1): 5 μg de RNA MS2 são incubados com inibidor de RNase Protector por 1 hora a +37 °C em um volume final de 50 μl. A quantidade de inibidor que não causa nenhuma degradação do RNA MS2 é referida como “RNase 1”.
Ausência de ribonuclease (2): 5 μg de RNA MS2 são incubados com inibidor de RNase Protector por 1 hora a +37 °C, depois de 10 minutos a +65 ºC em um volume final de 50 μl. A quantidade de inibidor que causa nenhuma degradação do RNA MS2 é referida como “RNase 2”.
Definição da unidade
Uma unidade do inibidor de RNase Protector é definida como a quantidade de proteína necessária para inibir 50% da atividade de 5 ng de RNase A.
Teor de unidades: A atividade é medida segundo Blackburn como a capacidade de inibir a hidrólise de citidina-2′ cíclica: Ácido 3′-monofosfórico. Em condições de ensaio, 200 U do inibidor de RNase Protector inibe 50% da atividade de 1 μg de RNase A.
Atividade por volume: 40 U/μl
Teor de unidades: A atividade é medida segundo Blackburn como a capacidade de inibir a hidrólise de citidina-2′ cíclica: Ácido 3′-monofosfórico. Em condições de ensaio, 200 U do inibidor de RNase Protector inibe 50% da atividade de 1 μg de RNase A.
Atividade por volume: 40 U/μl
Nota de preparo
Concentração de trabalho:
de inibidor não interfere com o RT-PCR.)
- 5 a 10 U em RT-PCR em uma etapa
- 25 a 50 U em RT-PCR em duas etapas
- 20 U para transcrição in vitro
de inibidor não interfere com o RT-PCR.)
Outras notas
Especificações do produto:
Fonte: Pulmão de rato; o produto é produzido em E. coli recombinante
Ponto isoelétrico: pH 4,5
Temperatura na qual o inibidor de RNase Protector é ativo: 25 °C a +55 °C; a atividade parcial ainda é mensurável a +60 °C
Inativação: Em condições desnaturantes severas (temperaturas acima de +65 ºC), o inibidor é inativado
Biocarga: <50 UFC/ml
Teor de DNA: <100 pg/mg
Fonte: Pulmão de rato; o produto é produzido em E. coli recombinante
Ponto isoelétrico: pH 4,5
Temperatura na qual o inibidor de RNase Protector é ativo: 25 °C a +55 °C; a atividade parcial ainda é mensurável a +60 °C
Inativação: Em condições desnaturantes severas (temperaturas acima de +65 ºC), o inibidor é inativado
Biocarga: <50 UFC/ml
Teor de DNA: <100 pg/mg
Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.
Informações legais
AVISO AO COMPRADOR: AVISO LEGAL DE LICENÇA
Este produto é otimizado para uso em reação em cadeia da polimerase (PCR), coberto por patentes de propriedade da F. Hoffmann-La Roche Ltd ("Roche"). Nenhuma licença sob estas patentes de uso do processo de PCR é transmitida expressamente ou por embargo ao comprador por meio da compra deste produto. A licença para usar o processo de PCR para determinadas atividades de pesquisa e desenvolvimento acompanha a compra de certos reagentes da Roche, da Applied Biosystems ou de outros fornecedores licenciados′ quando usados juntamente com um termociclador autorizado, ou estão disponíveis diretamente através da Applied Biosystems. O uso para fins de diagnóstico requer licença da Roche. Pode-se obter mais informações sobre a compra de licenças contatando o Diretor de licenciamento no endereço: Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, Califórnia 94404, EUA.
Este produto é otimizado para uso em reação em cadeia da polimerase (PCR), coberto por patentes de propriedade da F. Hoffmann-La Roche Ltd ("Roche"). Nenhuma licença sob estas patentes de uso do processo de PCR é transmitida expressamente ou por embargo ao comprador por meio da compra deste produto. A licença para usar o processo de PCR para determinadas atividades de pesquisa e desenvolvimento acompanha a compra de certos reagentes da Roche, da Applied Biosystems ou de outros fornecedores licenciados′ quando usados juntamente com um termociclador autorizado, ou estão disponíveis diretamente através da Applied Biosystems. O uso para fins de diagnóstico requer licença da Roche. Pode-se obter mais informações sobre a compra de licenças contatando o Diretor de licenciamento no endereço: Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, Califórnia 94404, EUA.
LightCycler is a registered trademark of Roche
Código de classe de armazenamento
12 - Non Combustible Liquids
Classe de risco de água (WGK)
WGK 1
Ponto de fulgor (°F)
does not flash
Ponto de fulgor (°C)
does not flash
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