11465015001
Roche
Kit de proliferação celular II (XTT)
liquid, pkg of 1 kit, suitable for cell analysis, suitable for tissue culture
Sinônimo(s):
xtt
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About This Item
Código UNSPSC:
12352200
Produtos recomendados
forma
liquid
Nível de qualidade
uso
sufficient for ≤2,500 tests
embalagem
pkg of 1 kit
fabricante/nome comercial
Roche
condição de armazenamento
protect from light
técnica(s)
tissue culture: suitable
λmax
450-500 nm
aplicação(ões)
cell analysis
detection
método de detecção
colorimetric
temperatura de armazenamento
−20°C
Categorias relacionadas
Descrição geral
O kit de proliferação celular II (XTT) é um ensaio colorimétrico para a quantificação não radioativa de proliferação celular, viabilidade e citotoxicidade. O material amostrado são células aderentes ou em suspensão cultivadas em microplacas de 96 poços.
Os ensaios colorimétricos analisam o número de células viáveis por meio da clivagem de sais de tetrazólio adicionados ao meio de cultura. Essa técnica não requer lavagem nem coleta de células, e todo o ensaio, desde a microcultura até a análise dos dados por um leitor de ELISA, é feito na mesma microplaca.
Mais recentemente, foi descrito o sal de tetrazólio XTT. Ao contrário do MTT, o produto de clivagem do XTT é solúvel em água; portanto, a etapa de solubilização não é necessária. O sal de tetrazólio XTT é clivado em formazan por um mecanismo celular complexo. A biorredução ocorre somente em células viáveis e está relacionada à produção de NAD(P)H por meio da glicólise. Portanto, a quantidade de corante formazan formado está diretamente correlacionada ao número de células metabolicamente ativas na cultura.
Os ensaios colorimétricos analisam o número de células viáveis por meio da clivagem de sais de tetrazólio adicionados ao meio de cultura. Essa técnica não requer lavagem nem coleta de células, e todo o ensaio, desde a microcultura até a análise dos dados por um leitor de ELISA, é feito na mesma microplaca.
Mais recentemente, foi descrito o sal de tetrazólio XTT. Ao contrário do MTT, o produto de clivagem do XTT é solúvel em água; portanto, a etapa de solubilização não é necessária. O sal de tetrazólio XTT é clivado em formazan por um mecanismo celular complexo. A biorredução ocorre somente em células viáveis e está relacionada à produção de NAD(P)H por meio da glicólise. Portanto, a quantidade de corante formazan formado está diretamente correlacionada ao número de células metabolicamente ativas na cultura.
Aplicação
O Kit de proliferação celular II (XTT) é usado para a quantificação não radioativa, espectrofotométrica da proliferação celular e viabilidade em populações celulares usando um formato de placa de 96 poços. Ele pode ser utilizado para:
- Medição da proliferação celular em resposta a fatores de crescimento, citocinas, mitógenos e nutrientes.
- Análise de compostos citotóxicos e citostáticos, como medicamentos antineoplásicos e outros compostos farmacêuticos.
- Avaliação de anticorpos inibidores do crescimento e mediadores fisiológicos que inibem o crescimento celular.
- Teste de biocompatibilidade de várias estruturas poliméricas (scaffolds) usadas na engenharia de tecidos ósseos para crescimento de células ósseas.
- ensaio de viabilidade celular.
Características e benefícios
- Seguro e fácil: Elimine isótopos radioativos, etapas de lavagem e reagentes adicionais.
- Preciso: A absorbância obtida está fortemente correlacionada com o número de células.
- Sensível: Detecte baixos números de células.
- Rápido: Processe um grande número de amostras usando um leitor de ELISA de vários poços.
Embalagem
1 kit contendo 2 componentes.
Princípio
O ensaio se baseia na clivagem do sal de tetrazólio XTT na presença de um reagente de acoplamento de elétrons, o que produz um sal de formazan solúvel. A conversão só ocorre em células viáveis. As células cultivadas em placa de cultura de tecidos de 96 poços são incubadas com a mistura de marcação com XTT por 2-20 horas. Após este período de incubação, o corante formazan formado é quantificado usando um espectrofotômetro de varredura de vários poços (leitor de ELISA). A absorbância medida está diretamente correlacionada ao número de células viáveis.
Ensaios de proliferação e viabilidade celular são particularmente importantes para aplicações de rotina em biologia celular. Os sais de tetrazólio (p. ex., MTT, XTT, WST-1) são particularmente úteis para esse tipo de análise. Os sais de tetrazólio são clivados em formazan pelo sistema de redutase de succinato-tetrazólio (EC 1.3.99.1), que pertence à cadeia respiratória da mitocôndria e só é ativo em células metabolicamente intactas.
Ensaios de proliferação e viabilidade celular são particularmente importantes para aplicações de rotina em biologia celular. Os sais de tetrazólio (p. ex., MTT, XTT, WST-1) são particularmente úteis para esse tipo de análise. Os sais de tetrazólio são clivados em formazan pelo sistema de redutase de succinato-tetrazólio (EC 1.3.99.1), que pertence à cadeia respiratória da mitocôndria e só é ativo em células metabolicamente intactas.
Nota de preparo
Solução de trabalho: Preparo das soluções
Descongele o reagente de marcação com XTT e o reagente de acoplamento de elétrons, respectivamente, em banho-maria a 37 °C. Misture bem cada frasco para obter uma solução transparente.
Mistura de marcação com XTT
Para realizar um ensaio de proliferação celular (XTT) com uma microplaca (96 poços), misture 5 ml do reagente de marcação com XTT com 0,1 ml do reagente de acoplamento de elétrons.
Observação: Para obter resultados confiáveis, descongele e misture o reagente de marcação com XTT e o reagente de acoplamento de elétrons imediatamente antes do uso.
Instruções de trabalho
As células são cultivadas em microplacas (grau para cultura de tecidos, 96 poços, fundo chato) em um volume final de 100 μl de meio de cultura por poço, de acordo com as necessidades de meio das células em atmosfera umidificada (p.ex., 37 °C, CO2 6,5%).
O período de incubação das culturas de células depende da abordagem experimental específica e da linhagem celular usada no ensaio. Na maioria das configurações experimentais, a incubação de células por 24 a 96 horas é adequada.
Depois do período de incubação, adicione 50 μl da mistura de marcação com XTT, preparada como descrito acima (concentração final de XTT de 0,3 mg/ml), a cada poço.
Incube a microplaca por 4 a 24 horas em atmosfera umidificada (p.ex., 37 °C, CO2 6,5%).
Observação: O tempo de incubação varia com a configuração experimental específica (p. ex., tipo de célula e concentração de células usada). Portanto, recomendamos medir a absorção como descrito em diferentes pontos no tempo após a adição da mistura de marcação com XTT (p. ex., 4, 6, 8, 12 e 18 horas), usando a mesma microplaca para determinar o período ideal de incubação para uma configuração experimental específica.
Condições de armazenamento (solução de trabalho): Descongelar os reagentes imediatamente antes do uso. Recomenda-se o preparo de alíquotas adequadas [são necessários 5 ml de reagente de marcação com XTT e 0,1 ml do reagente de acoplamento de elétrons para correr o ensaio com uma microplaca (96 poços)]
Obs.: Evite descongelar e congelar repetidamente.
Descongele o reagente de marcação com XTT e o reagente de acoplamento de elétrons, respectivamente, em banho-maria a 37 °C. Misture bem cada frasco para obter uma solução transparente.
Mistura de marcação com XTT
Para realizar um ensaio de proliferação celular (XTT) com uma microplaca (96 poços), misture 5 ml do reagente de marcação com XTT com 0,1 ml do reagente de acoplamento de elétrons.
Observação: Para obter resultados confiáveis, descongele e misture o reagente de marcação com XTT e o reagente de acoplamento de elétrons imediatamente antes do uso.
Instruções de trabalho
As células são cultivadas em microplacas (grau para cultura de tecidos, 96 poços, fundo chato) em um volume final de 100 μl de meio de cultura por poço, de acordo com as necessidades de meio das células em atmosfera umidificada (p.ex., 37 °C, CO2 6,5%).
O período de incubação das culturas de células depende da abordagem experimental específica e da linhagem celular usada no ensaio. Na maioria das configurações experimentais, a incubação de células por 24 a 96 horas é adequada.
Depois do período de incubação, adicione 50 μl da mistura de marcação com XTT, preparada como descrito acima (concentração final de XTT de 0,3 mg/ml), a cada poço.
Incube a microplaca por 4 a 24 horas em atmosfera umidificada (p.ex., 37 °C, CO2 6,5%).
Observação: O tempo de incubação varia com a configuração experimental específica (p. ex., tipo de célula e concentração de células usada). Portanto, recomendamos medir a absorção como descrito em diferentes pontos no tempo após a adição da mistura de marcação com XTT (p. ex., 4, 6, 8, 12 e 18 horas), usando a mesma microplaca para determinar o período ideal de incubação para uma configuração experimental específica.
Condições de armazenamento (solução de trabalho): Descongelar os reagentes imediatamente antes do uso. Recomenda-se o preparo de alíquotas adequadas [são necessários 5 ml de reagente de marcação com XTT e 0,1 ml do reagente de acoplamento de elétrons para correr o ensaio com uma microplaca (96 poços)]
Obs.: Evite descongelar e congelar repetidamente.
Outras notas
Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.
Somente componentes do kit
Nº do produto
Descrição
- XTT Labeling Reagent
- Electron-coupling Reagent
produto relacionado
Código de classe de armazenamento
12 - Non Combustible Liquids
Classe de risco de água (WGK)
nwg
Ponto de fulgor (°F)
does not flash
Ponto de fulgor (°C)
does not flash
Certificados de análise (COA)
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