ORFPOOLWG

MISSION^® TRC3-Humangesamtgenom-Lentivirus-ORF-Pool

• Synonym(e): ORF-Sammlung
• UNSPSC-Code: 41106609
• NACRES: NA.51

Eigenschaften

• Verpackung: pkg of 8x25 μL (vials)
• Qualitätsniveau: 200
• Konzentration: 5x10⁸ VP/ml (via p24 assay)
• Methode(n): capture ELISA: 5 × 10⁸ TU/mL using p24
• Versandbedingung: dry ice
• Lagertemp.: −70°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Bis dato verfügen wir über die größte Sammlung von vollständig sequenzierten und vorgeklonten menschlichen Open Reading Frames (ORFs) und bieten diese in einem gepoolten, lentiviralen Gesamtgenom-Format an. Die am Broad Institute entwickelte MISSION^®-TRC3-Humangesamtgenom-ORF-Pool-Bibliothek enthält über 17.000 eindeutige ORF-Klone, die mehr als 12.000 Gene codieren, zur Verwendung beim Screening auf Überexpression. In dieser exklusiven Bibliothek ist mit jedem ORF-Klon eine einzigartige 24-Nukleotid-Barcodesequenz verknüpft, um Treffer einfach zu identifizieren und eine tiefe Sequenzierung/Dekonvolution zu ermöglichen.


Diese gebrauchsfertige gepoolte MISSION-TRC3-Human-Lenti-ORF-Pool-Bibliothek ermöglicht eine stabile Integration, Zellanreicherung und langfristige Genexpression in schwer transfizierbaren Zelllinien unter Verwendung unserer erstklassigen Lentivirus-Herstellung. Diese Sammlung gibt Forschenden einzigartige Hilfsmittel an die Hand, um durch die Modulation der Gen- und Proteinexpression Einblicke in die Genfunktion zu gewinnen.

Der klassische genetische Ansatz zur Erforschung biologischer Signalwege beginnt normalerweise mit der Identifizierung von Mutationen, die einen relevanten Phänotyp verursachen. Überexpression oder Fehlexpression eines wildtypischen Genprodukts kann jedoch auch mutante Phänotypen hervorrufen. Diese sind für Genetiker ein alternatives, leistungsstarkes Werkzeug zur Identifizierung der Signalwegkomponenten, die bei der herkömmlichen Loss-of-Function-Analyse eventuell nicht erkannt werden. Der lentivirale Gesamtgenom-ORF-Pool füllt diese Lücke und bietet Forschern ein leistungsstarkes Werkzeug für die Durchführung entscheidender biologischer Experimente.



LentiORFs sind ein ideales zeitsparendes Werkzeug für die Proteinexpression und Genanalyse, ob bei der Durchführung von Genüberexpressionsstudien oder Validierung von Gen-Knockdown/Knockout-Ergebnissen eines RNAi- oder CRISPR-Experiments. Des Weiteren müssen Forschende auch die “Treffer” von Screenings validieren, um falsch positive Ergebnisse zu bestätigen und auszuschließen. Es muss bestätigt werden, ob die erkannten Phänotypen mit dem Zielgen von Interesse verbunden sind. Die weithin akzeptierte Methode für die Validierung eines Zielgens ist die erneute Expression des Gens von Interesse mittels LentiORFs.

Die MISSION-TRC3-Humangesamtgenom-LentiORF-Pool-Bibliothek wird in Aliquots von 8×25 μl mit einem Mindesttiter von 5×10⁸ TU/ml (gemessen mittels p24-Assay) angeboten.

Anwendung

Funktionelle Genomik/Überexpressionstest/Targetvalidierung

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Effizientes Screening des gesamten menschlichen Genoms (~12.000 Gene) am Labortisch ohne Robotik oder spezielle Ausrüstung
• Vorklonierte, sequenzbestätigte, expressionbereite Klone
• Idealer Shortcut zur Proteinexpression: Verwendung von gepoolten lentiviralen ORFs für die Expression von proteincodierenden Genen zur Beurteilung deren Funktion
• Einfache Dekonvolution: Die Puromycin-Bibliothek enthält eine dem V5-Tag und Translationsstopp nachgeschaltete 24-Nukleotid-Barcodesequenz. Jeder Klon enthält eine einzigartige Barcodesequenz, die leicht identifiziert werden kann und eine einfache Dekonvolution von gepoolten Screening-Experimenten ermöglicht
• Der EF1a-Promoter steuert die Expression des ORF-Konstrukts und stellt eine Alternative zum CMV-Promoter dar, der für bestimmte Zelltypen möglicherweise nicht geeignet ist
• Die Puromycin-Resistenz ermöglicht Doppelselektionsexperimente in Zellen mit Neomycin- oder Blasticidin-Resistenz
• Angereicherte Zellpopulation: Verwenden Sie eine Puromycin-Selektion nach der Transduktion, um eine langfristig stabile Zelllinie zu erzeugen
• Das V5-Epitop-Tag ermöglicht Pulldown- und Co-Immunpräzipitationsexperimente, um Protein-Protein-Interaktionen zu bestimmen oder ORFs per Immunfluoreszenz zu markieren und zu visualisieren
• Es werden positive und negative Selektionskontrollen (BFP und GFP) bereitgestellt, mit denen Forschende den Erfolg ihrer gepoolten Screening-Experimente zuverlässig messen können
• Lentivirale ORFs können eine Vielzahl von Säugetierzellen (einschließlich schwer zu transfizierender oder primärer Zelllinien) per Transduktion infizieren, um die Überexpression von Genen für Screening-Anwendungen zu erleichtern
• Schnelles und kostengünstiges Screening mit einfacher Trefferidentifizierung durch den Dekonvolutionsservice von Sigma-Aldrich
• Zeitersparnis: Keine PCR-, Klonierungs- und DNA-Sequenzierungsschritte für die Verifizierung erforderlich

Angaben zur Herstellung

Puro „Kill-Curve“ und Bestimmung der koloniebildenden Einheit (CFU) pro ml. Vor dem Bibliotheken-basierten Screening müssen zwei vorläufige Tests durchgeführt werden. Weitere Informationen finden Sie unter Lentipools oder im technischen Merkblatt.

Sonstige Hinweise

Das Produkt ist nur für Forschungs- und Entwicklungszwecke bestimmt und nicht für Arzneimittelanwendungen, häuslichen Gebrauch oder sonstige Zwecke vorgesehen. Informationen zu den Gefahren und zur sicheren Handhabung sind dem Sicherheitsdatenblatt zu entnehmen. Obwohl die produzierten lentiviralen Transduktionspartikel replikationsinkompetent sind, wird dennoch empfohlen, diese bei der Handhabung im Labor als Organismen der Risikogruppe 2 zu behandeln. Alle veröffentlichten Richtlinien zur Risikogruppe 2 für die Handhabung im Labor und Abfalldekontaminierung sind zu befolgen.

Rechtliche Hinweise

MISSION is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable