Spektrometr podczerwieni Direct Detect^® do ilościowego oznaczania białek całkowitych

Jak wykorzystać spektroskopię w podczerwieni do konsekwentnego pomiaru całkowitego stężenia białka (z jednego eksperymentu do drugiego) i bez znajomości sekwencji mierzonego białka

Dokładny i konsekwentny pomiar całkowitego stężenia białka w próbce może generować bardziej wiarygodne testy immunologiczne, bardziej pouczające Western bloty lizatów i usprawnioną optymalizację oczyszczania białek. Spektroskopia w podczerwieni jest od dawna akceptowaną metodą dokładnej kwantyfikacji białek; jednak tradycyjnie technologia ta wymagała znacznej wiedzy w zakresie spektroskopii i dużych instrumentów.

System Direct Detect sprawił, że spektroskopia w podczerwieni stała się dostępna dla każdego laboratorium białkowego, przynosząc korzyści badaczom wykonującym kilka procedur kwantyfikacji białek tygodniowo, a zwłaszcza badaczom, którzy są niezadowoleni z innych metod kwantyfikacji (takich jak spektroskopia UV-Vis oraz testy Bradford, BCA i Lowry).

Metoda bezpośredniego wykrywania

Po wygenerowaniu jednorazowej krzywej wzorcowej, która jest przechowywana w urządzeniu, wystarczy umieścić 2 μL próbki i triplikatu oraz ślepej próby na wolnej od testów karcie membranowej i włożyć ją do spektrometru. System zgłasza średnie stężenie białka z 3 plamek i wyświetla widmo IR próbki.

Korzyści płynące z zastosowania spektrometru Direct Detect

• Dzięki pomiarowi wiązań amidowych w łańcuchach białkowych, system dokładnie określa nieodłączny składnik każdego białka bez polegania na składzie aminokwasowym, właściwościach wiązania barwnika lub potencjale redukcji i utleniania (redoks).
• Wymagana minimalna nauka, może być używana bez doświadczenia w IR
• Minimalne lub zerowe przygotowanie próbki
• Oszczędza cenne próbki - wymaga tylko 2 μL na pojedynczą analizę
• Nie wymaga analizy (analiza oparta na składzie chemicznym)
• System przechowuje i ponownie wykorzystuje krzywe wzorcowe
• Generacja nowej krzywej kalibracyjnej zajmuje około 30 minut

Video. Spektrometr podczerwieni z bezpośrednim wykrywaniem pomaga jednemu klientowi w ilościowym określeniu całkowitego białka
przy jednoczesnym oszczędzaniu próbki

Rysunek 1. Pomiar stężenia białka bez zakłóceń ze strony SDS, dzięki nienakładającym się sygnałom IR w spektrometrze Direct Detect.

Cechy spektrometru Direct Detect

Spektrometr podczerwieni:

• Spektrometr podczerwieni z transformatą Fouriera (FT-IR)
• Kompaktowe wymiary (11 cali x 8 cali; 30 cm x 22 cm)
• Zakres analizy 500 - 6000 cm^-1
• Działa w trybie transmisyjnym analizując wysuszoną próbkę
• Wentylator wbudowany w komorę próbki pomaga wysuszyć próbkę
• Wewnętrzny czujnik wilgotności kontroluje warunki analizy
• Intuicyjne oprogramowanie do testów i analizy

Karta próbki bez testów:

• Jednorazowy, 4-pozycyjny nośnik próbki
• Łatwa, jednoetapowa aplikacja próbki
• Niezawodne przechowywanie próbki
• Spójna prezentacja próbki w centrum plamki do przesłuchania przez wiązkę MIR
• Bezpośrednia analiza (nie wymaga reakcji ani modyfikacji chemicznej)