Pierwotne ludzkie komórki mięśni szkieletowych i pożywki wzrostowe

Produkty te są dostępne w Stanach Zjednoczonych, Kanadzie i wybranych krajach europejskich.

• System hodowli komórek mięśni szkieletowych
• Kontrola jakości systemu hodowli komórek pierwotnych ludzkich mięśni szkieletowych
• Materiały do pierwotnej hodowli komórek mięśni szkieletowych

System hodowli komórek mięśni szkieletowych<

Nowe komórki mięśni szkieletowych wywodzą się ze spoczynkowych komórek satelitarnych, które znajdują się we włóknach mięśniowych pomiędzy blaszką podstawną a sarkolemą. Uśpione komórki satelitarne są aktywowane przez bodźce, takie jak uszkodzenie mięśni. Po aktywacji komórki, zwane teraz mioblastami, zaczynają się namnażać i łączą się z uszkodzonymi włóknami mięśniowymi lub między sobą, tworząc nowe miotuby. W badaniu uszkodzeń mięśni, pierwotne ludzkie komórki mięśni szkieletowych (SkMC) okazały się przydatne w wyjaśnianiu mechanizmów regeneracji i różnicowania mięśni, a także w modelowaniu zaburzeń i chorób nerwowo-mięśniowych.

PromoCell^® Pierwotne ludzkie komórki mięśni szkieletowych są wytwarzane z normalnej ludzkiej tkanki mięśni szkieletowych z różnych lokalizacji, w tym M. pectoralis major lub M. gluteus (informacje o źródle partii są dostępne na życzenie). Komórki te mogą być indukowane do różnicowania w wielojądrowe syncytia przy użyciu PromoCell^® Skeletal Muscle Cell Differentiation Medium. Wkrótce po izolacji, wszystkie ludzkie komórki mięśni szkieletowych są kriokonserwowane przy przejściu 2 (P2) przy użyciu opatentowanej, pozbawionej surowicy pożywki do zamrażania Cryo-SFM (C-29910). Każda fiolka zawiera co najmniej 500 000 żywych komórek po rozmrożeniu. Ludzkie komórki mięśni szkieletowych są również dostępne jako proliferujące kultury komórkowe wygenerowane z kriokonserwowanych komórek, które zostały rozmrożone i hodowane przez trzy dni.

• Protokół hodowli ludzkich komórek mięśni szkieletowych

Protokół różnicowania ludzkich komórek mięśni szkieletowych (patrz poniżej)

Podłoże do wzrostu komórek mięśni szkieletowych to podłoże o niskiej zawartości surowicy opracowane do ekspansji kultur ludzkich komórek mięśni szkieletowych.Pożywka do różnicowania komórek mięśni szkieletowych jest pożywką bez surowicy opracowaną w celu indukowania fuzji komórek mięśni szkieletowych do miotub z typowymi wielojądrowymi syncytiami. Pożywki te są zoptymalizowane pod kątem hodowli pierwotnych komórek ludzkich, ale mogą być również stosowane do hodowli komórek mięśni szkieletowych myszy, szczurów, psów i królików.  Pożywka do hodowli komórek mięśni szkieletowych jest dostępna w dwóch formatach: "gotowy do użycia" lub "zestaw". Opcja "gotowa do użycia" składa się z butelki pożywki podstawowej o pojemności 500 ml i jednej fiolki z mieszanką SupplementMix. Zestaw pożywki do wzrostu komórek mięśni szkieletowych składa się z butelki o pojemności 500 ml pożywki podstawowej i zestawu SupplementPack (zestaw pojedynczych fiolek z odmierzonymi suplementami), dając użytkownikowi pełną kontrolę nad składem pożywki. SupplementMix lub SupplementPack jest dodawany do Basal Medium w celu przygotowania kompletnej pożywki dla komórek mięśni szkieletowych. Basal Medium (z czerwienią fenolową lub bez), SupplementMix i SupplementPack są również dostępne do indywidualnego zakupu.

Szkieletowa pożywka dla komórek mięśniowych Szczegóły suplementacji

Szkieletowa pożywka dla komórek mięśniowych zawiera wszystkie czynniki wzrostu i suplementy niezbędne do optymalnego wzrostu ludzkich komórek mięśni szkieletowych, w tym naskórkowy czynnik wzrostu, podstawowy czynnik wzrostu fibroblastów i insulinę (Tabela 1). Pożywka do różnicowania komórek mięśni szkieletowych jest pożywką bez surowicy zawierającą insulinę. Pożywki te nie zawierają antybiotyków ani środków przeciwgrzybiczych i są przeznaczone do stosowania w inkubatorze z atmosferą 5% CO₂

Końcowe stężenia suplementów pożywki do różnicowania komórek mięśni szkieletowych (po dodaniu do pożywki)

.

Składnik	Komórka mięśnia szkieletowego Podłoże wzrostu	Komórki mięśni szkieletowych Podłoże różnicujące
Fetal Calf Serum	0.05 mL / mL	-
Fetuina (bydlęca)	50 μg / mL	-
Epidermalny czynnik wzrostu (rekombinowany ludzki)	10 ng / ml	-
Podstawowy czynnik wzrostu fibroblastów (rekombinowany ludzki)	1 ng / ml	-
Insulina (rekombinowana ludzka)	10 μg / mL	10 μgg / mL
Deksametazon	0.4 μg / mL	-

Przygotowanie pożywki uzupełniającej do hodowli komórek mięśni szkieletowych

• Odmroź pożywkę uzupełniającą do hodowli komórek mięśni szkieletowych (SupplementMix) lub pożywkę uzupełniającą (SupplementPack) w temperaturze 15 - 25°C.
• Septycznie wymieszaj roztwory suplementów przez ostrożne pipetowanie w górę i w dół.
• Przenieś całą zawartość każdego suplementu do pożywki podstawowej dla komórek mięśni szkieletowych.
• Zamknij butelkę i delikatnie wiruj, aż do uzyskania jednorodnej mieszaniny.

Instrukcje dotyczące stosowania pożywki do różnicowania komórek mięśni szkieletowych

• W celu różnicowania ludzkich komórek mięśni szkieletowych (SkMC), komórki powinny być hodowane w pożywce do wzrostu komórek mięśni szkieletowych, aż osiągną około 60-80% konfluencji.
• Zastąpić pożywkę wzrostową pożywką do różnicowania komórek mięśni szkieletowych.
• Po 2 - 8 dniach można zaobserwować rozległe tworzenie wielojądrowych syncytiów.
• W celu stabilnego różnicowania SkMC, zastąpić pożywką wzrostową komórek mięśni szkieletowych po 5 dniach inkubacji w pożywce do różnicowania komórek mięśni szkieletowych.

Przechowywanie i stabilność produktów z komórek mięśni szkieletowych

• Po dostarczeniu natychmiast przechowywać pożywkę podstawową dla komórek mięśni szkieletowych w temperaturze 4-8°C w ciemności; nie zamrażać. Przechowuj Skeletal Muscle Cell SupplementMix lub SupplementPack w temperaturze -20 °C.
• Jeśli produkty są przechowywane zgodnie z zaleceniami, zachowują stabilność do podanej daty ważności.
• Po dodaniu suplementów do Skeletal Muscle Cell Basal Medium, okres przechowywania kompletnej pożywki wynosi sześć tygodni w temperaturze 4 - 8 °C. Nie zamrażać kompletnej pożywki.
• Do użytku podgrzej tylko porcję kompletnej pożywki dla komórek mięśni szkieletowych potrzebną do jednorazowego użycia, a pozostałą pożywkę przechowuj w lodówce w temperaturze 4 - 8 °C.
• Po dostarczeniu, komórki poddane kriokonserwacji powinny być przechowywane w ciekłym azocie lub posiewane bezpośrednio.
• Proliferujące komórki muszą być przetworzone natychmiast.

Kontrola jakości systemu hodowli komórek mięśni szkieletowych

Ludzkie komórki mięśni szkieletowych

Sztywne testy kontroli jakości (QC) są przeprowadzane dla każdej partii ludzkich komórek mięśni szkieletowych.

• Analiza morfologii komórek, adherencji i żywotności komórek.
• Testy immunohistochemiczne dla markerów specyficznych dla typu komórek.
• Wydajność wzrostu, testowana poprzez wielokrotne przejścia do 15 podwojeń populacji (PD) w warunkach hodowli bez antybiotyków i środków przeciwgrzybiczych.
• Potencjał różnicowania, mierzony zdolnością do różnicowania się w wielojądrowe syncytia.
• Testowanie pod kątem braku zanieczyszczeń wirusowych (HIV-1, HIV-2, HBV, HCV, HTLV-1, HTLV-2) i mikrobiologicznych (grzyby, bakterie i mykoplazma). Środki ostrożności znajdują się w odpowiedniej karcie charakterystyki substancji niebezpiecznej (SDS).
• Szczegółowy certyfikat analizy (CoA) dla każdej partii jest dostępny do pobrania.

Specyfikacje komórek mięśni szkieletowych (SkMC)

Produkt	Gęstość płytki	Przechodzenie po rozmrożeniu	Marker	Podwojenie populacji
Ludzkie komórki mięśni szkieletowych (SkMC)	3,500 - 7,000 komórek na cm²	P2	Testowane różnicowanie miozyny sarkomerycznej	> 15

Kontrola jakości pożywki do wzrostu i różnicowania komórek mięśniowych

Wszystkie partie pożywki do wzrostu komórek mięśni szkieletowych są poddawane rygorystycznym i kompleksowym testom kontroli jakości z wykorzystaniem pierwotnych ludzkich SkMC. Każda partia jest sprawdzana pod kątem aktywności stymulującej wzrost, wskaźnika przylegania i typowej morfologii SkMC wykorzystywanych do testów. Dodatkowo, pożywka do różnicowania komórek mięśni szkieletowych jest walidowana pod kątem zdolności do pełnego indukowania różnicowania SkMC. Wszystkie partie pożywek zostały przetestowane pod kątem braku zanieczyszczeń mikrobiologicznych (grzybów, bakterii, mykoplazmy). Środki ostrożności można znaleźć w odpowiedniej karcie charakterystyki (SDS).

Uwaga: Ze względu na niską zawartość surowicy lub jej brak, pożywki PromoCell^® nie nadają się do neutralizacji trypsyny na bazie surowicy (jak w przypadku podhodowli komórek).Zamiast tego zalecamy użycie naszego zestawu DetachKit  (C-41200, C-41210, C-41220), który zawiera HEPES BSS, Trypsin/EDTA i Trypsin Neutralizing Solution.

Przeznaczenie pierwotnych ludzkich komórek mięśni szkieletowych i pożywek do wzrostu keratynocytów

Pierwotne ludzkie komórki mięśni szkieletowych i pożywki do wzrostu komórek mięśni szkieletowych są przeznaczone wyłącznie do użytku in vitro , a nie do procedur diagnostycznych lub terapeutycznych. Informacje dotyczące bezpieczeństwa można znaleźć w odpowiedniej karcie charakterystyki substancji niebezpiecznej.