Pierwotne ludzkie osteoblasty i pożywki do wzrostu/różnicowania osteoblastów

Produkty te są dostępne w Stanach Zjednoczonych, Kanadzie i wybranych krajach europejskich.

• System hodowli komórek osteoblastów
• Quality Control for Primary Human Osteoblasts and Osteoblast Growth Media
• Materiały do hodowli pierwotnych osteoblastów

System hodowli ludzkich komórek osteoblastów

Osteoblasty to wysoce wyspecjalizowane komórki wywodzące się z mezenchymy. Ludzkie osteoblasty odgrywają ważną rolę w tworzeniu i przebudowie kości. In vivo wytwarzają osteoid, macierz zewnątrzkomórkową bogatą w kolagen typu I. Podczas osteogenezy, naturalnego procesu dojrzewania do osteocytów, osadzają się w macierzy kostnej i przestają proliferować.

PromoCell^® Ludzkie osteoblasty (HOB) są produkowane z tkanki kości udowej kolana i biodra. Wkrótce po izolacji wszystkie ludzkie osteoblasty są kriokonserwowane w stadium 2 (P2) przy użyciu opatentowanego, niezawierającego surowicy podłoża mrożącego Cryo-SFM. Każda rozmrożona kriofiolka zawiera co najmniej 500 000 żywych komórek. Osteoblasty ludzkie są również dostępne jako proliferujące kultury komórkowe wygenerowane z kriokonserwowanych komórek, które zostały rozmrożone, a następnie hodowane przez trzy dni.

• Protokół hodowli ludzkich osteoblastów
• In Vitro Differentiation of Primary Human Osteoblasts into Mineralized Bone

Podłoże Osteoblast Growth Medium jest zoptymalizowana do hodowli ludzkich osteoblastów in vitro a pożywka do mineralizacji osteoblastów została opracowana w celu wywołania silnej mineralizacji w hodowlach ludzkich osteoblastów za pomocą jednoetapowego protokołu, co prowadzi do rozległych pozakomórkowych złogów wapnia po 21 dniach. Pożywki te są zoptymalizowane pod kątem hodowli pierwotnych komórek ludzkich, ale mogą być również stosowane do hodowli osteoblastów bydlęcych, mysich i szczurzych, a także linii komórkowych osteoblastów. Podłoże do hodowli osteoblastów (gotowe do użycia) składa się z jednej butelki o pojemności 500 ml z pożywką podstawową i jednej fiolki z mieszanką uzupełniającą. Dodanie suplementu SupplementMix do pożywki podstawowej stanowi kompletną pożywkę dla osteoblastów. Osteoblast Basal Medium (z lub bez czerwieni fenolowej) i Osteoblast Growth Medium SupplementMix są również dostępne do oddzielnego zakupu.

Szczegóły suplementacji Osteoblast Media

Osteoblast Growth Medium zawiera wszystkie niezbędne składniki do optymalnego wzrostu ludzkich osteoblastów. Pożywka do mineralizacji osteoblastów zawiera wszystkie składniki niezbędne do mineralizacji ludzkich osteoblastów. Pożywki Osteoblast nie zawierają antybiotyków ani środków przeciwgrzybiczych i są przeznaczone do stosowania w inkubatorze z 5% atmosferycznym CO₂.

Finalne stężenia suplementów Osteoblast Growth Medium (po dodaniu do pożywki)

Składnik	Stężenie końcowe
Płodowa surowica cielęca	0.1 mL / mL

Przygotowanie pożywki uzupełniającej dla pierwotnych ludzkich osteoblastów

• Odmroź Osteoblast Media SupplementMix lub SupplementPack w temperaturze 15 - 25 °C.
• Aseptycznie wymieszaj roztwory suplementów, delikatnie pipetując w górę i w dół.
• Przenieś całą zawartość każdego suplementu do Osteoblast Basal Medium.
• Zamknij butelkę i delikatnie zawiruj, aby uzyskać jednorodną mieszaninę.

Instrukcje użycia Osteoblast Mineralization Medium

• Umieść 3x10⁴ komórek HOB na studzienkę na 24-dołkowej płytce do hodowli tkankowej pokrytej kolagenem I.
• Pracuj w duplikatach:  Użyj HOB Growth Medium (C-27001) dla jednej studzienki jako kontroli negatywnej i Osteoblast Mineralization Medium (C-27020) dla drugiej studzienki.
• Inkubuj komórki przez 17 - 21 dni. Zmieniaj pożywkę co trzeci dzień, pracując ostrożnie, aby nie naruszyć monowarstwy komórek.
• Utrwal komórki i wybarw na markery osteogenne.
• Uwaga:Szczegółowe informacje można znaleźć w protokole In Vitro Różnicowanie pierwotnych ludzkich osteoblastów w zmineralizowaną kość

.Przechowywanie i stabilność osteoblastów i pożywki do wzrostu/różnicowania

• Po dostarczeniu natychmiast przechowywać pożywkę podstawową do osteoblastów w ciemności w temperaturze 4-8 °C; nie zamrażać. Przechowywać Osteoblast SupplementMix w temperaturze -20 °C.
• Jeśli produkty są przechowywane zgodnie z zaleceniami, zachowują stabilność do daty ważności podanej na etykiecie.
• Po dodaniu suplementów do Osteoblast Basal Medium, okres przechowywania kompletnej pożywki wynosi sześć tygodni w temperaturze 4-8 °C. Nie należy zamrażać kompletnej pożywki.
• W celu użycia, należy pobrać i podgrzać tylko taką objętość kompletnej pożywki Osteoblast, jaka jest potrzebna do jednorazowego użycia, a pozostałą pożywkę przechowywać w lodówce w temperaturze 4 - 8 °C.
• Po dostarczeniu, przechowuj kriokonserwowane komórki w ciekłym azocie lub bezpośrednio wysiewaj.
• Proliferujące komórki muszą być natychmiast przetwarzane.

Kontrola jakości dla pierwotnych ludzkich osteoblastów i pożywek do wzrostu/różnicowania

Kontrola jakości ludzkich osteoblastów (HOB)

Następujące sztywne testy kontroli jakości są przeprowadzane dla każdej partii ludzkich osteoblastów:

• Testowanie morfologii komórek, wskaźnika przylegania i żywotności komórek
• Testowanie histochemiczne fosfatazy alkalicznej i mineralizacji kości
• Testowanie wydajności wzrostu poprzez wielokrotne przejścia do 10 podwojeń populacji (PD) w warunkach hodowli bez antybiotyków i leków przeciwgrzybiczych<
• Testowanie na nieobecność HIV-1, HIV-2, HBV, HCV, HTLV-1, HTLV-2 i zanieczyszczeń mikrobiologicznych (grzybów, bakterii i mykoplazmy)

Szczegółowy certyfikat analizy (CoA) dla każdej partii jest dostępny do pobrania.

Specyfikacje ludzkich osteoblastów

Produkt	Gęstość płytki	Przechodzenie po rozmrożeniu	Marker	Podwojenie populacji
Ludzkie osteoblasty (HOB)	10 000 - 20 000 komórek na cm²	P2	Fosfataza alkaliczna+ Test mineralizacji	> 10

Kontrola jakości pożywki do wzrostu i różnicowania osteoblastów

Wszystkie partie pożywki do wzrostu osteoblastów są poddawane kompleksowym testom kontroli jakości. Testy te sprawdzają aktywność stymulującą wzrost, szybkość przylegania i typową morfologię komórek przy użyciu pierwotnych ludzkich osteoblastów. Ponadto, wszystkie partie Osteoblast Mineralization Medium są testowane pod kątem ich zdolności do indukowania mineralizacji w pierwotnych ludzkich osteoblastach. Dodatkowo, testy mikrobiologiczne zapewniają, że wszystkie partie podłoża do wzrostu/różnicowania osteoblastów są wolne od zanieczyszczeń mikrobiologicznych (grzybów, bakterii, mykoplazmy).

Przeznaczenie ludzkich pierwotnych osteoblastów i pożywek do wzrostu/różnicowania osteoblastów

Ludzkie osteoblasty i pożywki do wzrostu/różnicowania osteoblastów są przeznaczone wyłącznie do użytku in vitro , a nie do procedur diagnostycznych lub terapeutycznych. W celu uzyskania informacji dotyczących bezpieczeństwa należy zapoznać się z odpowiednią kartą charakterystyki.

Uwaga: Pożywki PromoCell mają niską lub zerową zawartość surowicy i nie nadają się do neutralizacji trypsyny (na przykład podczas subkulturowania komórek).Zamiast tego zalecamy użycie naszego zestawu DetachKit (C-41200, C-41210, C-41220), który zawiera HEPES BSS, trypsynę/EDTA i roztwór neutralizujący trypsynę.