Testy multipleksowe w immunologii: Szybsze profilowanie większej liczby biomarkerów immunologicznych
Immunologiczne testy multipleksowe umożliwiają badanie modulacji i ekspresji dziesiątek analitów jednocześnie z szybkością i czułością.
Czytaj więcej o
Dowiedz się, w jaki sposób zestawy multipleksowe MILLIPLEX® cytokin są używane w Forsyth Institute Multiplex Core w Cambridge, MA w tym filmie.
Immunology Multiplex Assays
Obliczanie cytokin i innych białek jest ważne dla zrozumienia stanów patologicznych, takich jak zapalenie, posocznica i choroby, takie jak choroby autoimmunologiczne, choroby układu krążenia, zespół metaboliczny, zaburzenia neurologiczne i nowotwory. Nasza szeroka i wiodąca w branży oferta multipleksowych paneli immunologicznych obejmuje zestawy do pomiaru cytokin, chemokin, czynników wzrostu, rozpuszczalnych receptorów cytokin, białek punktów kontrolnych, białek dopełniacza, autoprzeciwciał autoimmunologicznych, tkankowych inhibitorów metaloproteinaz (TIMP), metaloproteinaz macierzy (MMP), białek związanych z sepsą, biomarkerów skóry i immunoglobulin. Popularne anality zostały opisane w Tabeli 1.
Oparte na technologii xMAP® firmy Luminex, nasze multipleksowe testy immunologiczne MILLIPLEX® umożliwiają precyzyjną, wieloparametryczną analizę chorób i procesów leżących u ich podstaw.
Zastosowania multipleksowania biomarkerów immunologicznych
Istnieje wiele zastosowań multipleksowania biomarkerów immunologicznych. Obejmują one:
- Human oraz Analiza cytokin, chemokin i czynników wzrostu
- Badania wirusologiczne
- Badania nad autoprzeciwciałami
- Human and mouse ocena wysokiej czułości cytokin niskiego poziomu
- Profilowanie odpowiedzi immunologicznych w ciąży
Poniżej opisano przykłady wykorzystania multipleksowych testów immunologicznych w badaniach immunologicznych.
Cytokiny, chemokiny i czynniki wzrostu
Działając w fazie rozpoznawania, aktywacji lub efektorowej odpowiedzi immunologicznej, cytokiny modulują rozwój i czynności funkcjonalne limfocytów T, limfocytów B i komórek mieloidalnych. Wykorzystanie multipleksowych testów immunologicznych do ilościowego oznaczania cytokin, chemokin i czynników wzrostu pomaga w rozwoju badań, zapewniając zrozumienie różnych stanów patologicznych związanych z układem odpornościowym. Multipleksowanie pozwala badaczom na jednoczesne badanie analitów, oszczędzając czas, próbki i zasoby. Jest to szczególnie ważne w badaniach immunologicznych, gdzie liczne biomarkery immunologiczne odgrywają rolę w różnych szlakach.
Dowiedz się więcej o naszym najnowszym MILLIPLEX® Human oraz Panele multipleksowe cytokin/hemokin/czynników wzrostu naczelnych.
Interferony są powszechnie wyrażanymi cytokinami, które mają silne działanie przeciwwirusowe i antyproliferacyjne. Cytokiny te stanowią pierwszą linię obrony przed infekcjami wirusowymi i odgrywają ważną rolę w nadzorze immunologicznym nad komórkami złośliwymi. Rysunek 1 pokazuje równoległość wybranych interferonów, które MILLIPLEX® Human Interferon Multiplex Panel może pomóc analizować.
Rysunek 1.Równoległość/liniowość rozcieńczeń przy użyciu panelu ludzkich interferonów MILLIPLEX®. Analizy IFNα2, IFNλ2 i IFNλ3 przeprowadzono na próbkach bez domieszek, a analizę IFNγ przeprowadzono na próbkach z domieszkami. Próbki rozcieńczono w stosunku 1:2, jak wskazano w protokole, a następnie dalej rozcieńczono, jak wskazano na rysunku.
System dopełniacza
System dopełniacza składa się z trzech szlaków.
- Ścieżka klasyczna jest stymulowana przez kompleksy antygen-przeciwciało
- Ścieżka alternatywna spontanicznie aktywuje się w kontakcie z powierzchniami komórek patogennych
- Ścieżka lektyny wiążącej mannozę (MBL) rozpoznaje cukry mannozowe zwykle obecne tylko na powierzchniach komórek patogennych.
Możliwość oceny poziomów wielu białek dopełniacza w próbkach w celu określenia profili dopełniacza umożliwia dokładniejszą charakterystykę zmian w sygnalizacji stanu zapalnego i wrodzonej odpowiedzi immunologicznej. Panele MILLIPLEX® Human Complement mogą być stosowane do oznaczania poziomów 16 kluczowych białek dopełniacza w próbkach surowicy i osocza. Kaskadę dopełniacza zilustrowano na Rysunku 2, na którym składniki dopełniacza wyróżniono, aby wskazać, za pomocą którego zestawu MILLIPLEX® można je zmierzyć. Rysunek 3 przedstawia przykładowe dane przy użyciu tych paneli dopełniacza.
Rysunek 2.Kaskada dopełniacza z wyróżnionymi składnikami dopełniacza znajdującymi się w panelach ludzkiego dopełniacza MILLIPLEX®. Składniki dopełniacza w kolorze niebieskim znajdują się w produkcie nr HCMPEX1-19K, składniki w kolorze magenta znajdują się w produkcie nr. HCMP2MAG-19K, a komponenty w kolorze zielonym znajdują się w produkcie nr HC5B9-140K.
Rysunek 3.Istotne różnice w poziomach dopełniacza przy porównywaniu próbek zdrowego osocza z próbkami osocza odzyskanego po COVID-19. *p<0.05, **p<0.005.
MMP i TIMP
Matrycowe metaloproteinazy (MMP), rodzina proteaz cynkowych odpowiedzialnych za rozkład macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM), odgrywają kluczową rolę w normalnych procesach fizjologicznych, takich jak rozwój embrionalny i morfogeneza tkanek, przebudowa tkanek i kości, gojenie się ran i angiogeneza. Procesy te opierają się na roli MMP w rozszczepianiu receptorów na powierzchni komórek, uwalnianiu ligandów apoptotycznych, proliferacji i różnicowaniu komórek oraz modulacji aktywności chemokin. MMP o podobnej strukturze są syntetyzowane i wydzielane jako nieaktywne proenzymy, które do aktywacji wymagają proteolitycznego rozszczepienia. W procesie tym mogą pośredniczyć proteazy serynowe lub inne MMP. Wzrost ekspresji MMP występuje w odpowiedzi na szeroki zakres bodźców, w tym cząsteczki adhezyjne, czynniki wzrostu, cytokiny i hormony. Regulacja aktywności MMP jest kontrolowana głównie przez tkankowe inhibitory metaloproteinaz (TIMP). Dlatego zaburzenie równowagi MMP/TIMP może skutkować zapaleniem stawów, chorobami układu krążenia oraz wzrostem guza i przerzutami.
Analiza biomarkerów odpowiedzi immunologicznej i sepsy
Podczas gdy odpowiedź immunologiczna ma kluczowe znaczenie dla utrzymania homeostazy, nadmierna reakcja na infekcję, bakteryjną, wirusową, grzybiczą lub pasożytniczą, może skutkować niekontrolowaną odpowiedzią zapalną zwaną sepsą. Ta nadmierna reakcja na infekcję zakłóca homeostazę poprzez niepohamowaną odpowiedź zapalną, w tym regulację w górę biomarkerów sepsy, a także zwiększoną apoptozę narządów limfatycznych, co prowadzi do supresji odporności. Ciężka sepsa lub zespół ogólnoustrojowej reakcji zapalnej (SIRS) może powodować wstrząs septyczny, zespół dysfunkcji wielonarządowej (MODS) i śmierć. Panele MILLIPLEX® Human Sepsis pomagają zrozumieć rolę biomarkerów zapalnych zaangażowanych w sepsę.
Izotypowanie ludzkich i mysich immunoglobulin
Produkowane przez komórki plazmatyczne i limfocyty, immunoglobuliny (Igs) są kluczowo zaangażowane w odpowiedź immunologiczną, przyłączając się do antygenów i odgrywając rolę w ich niszczeniu. Igs można sklasyfikować według izotypów, klas, które różnią się funkcją i odpowiedzią na antygen ze względu na zmienność struktury. Pięć głównych izotypów to IgM, IgG, IgA, IgE i IgD - wszystkie występują u zdrowych osób. Niektóre choroby autoimmunologiczne, choroby przewodu pokarmowego i nowotwory złośliwe charakteryzują się specyficznymi niedoborami izotypów lub różnymi stężeniami jednego lub więcej izotypów. Stany chorobowe mogą wahać się od braku jednej klasy lub podklasy izotypu do całkowitego niedoboru klas Ig.
Badacze mogą jednocześnie oznaczać ilościowo klasy i podklasy Ig za pomocą zestawów do izotypowania MILLIPLEX®. Technologia multipleksowa xMAP® jest idealna do pomiaru poziomów tych izotypów, nie tylko zmniejszając liczbę testów, jak również ilość wymaganej próbki, ale także znacznie zmniejszając możliwe niedokładności wynikające z wykonywania wielu testów.
Włóknienie
Włóknienie i choroby pokrewne są odpowiedzialne za rosnące obciążenie chorobowością i śmiertelnością na całym świecie. MILLIPLEX® Fibrosis Panel 1 umożliwia badaczom lepsze zrozumienie złożonych procesów związanych z chorobami zwłóknieniowymi, w tym między innymi idiopatycznym zwłóknieniem płuc, zwłóknieniem wątroby i zwłóknieniem płuc. Rysunek 4 pokazuje kilka przykładowych danych analitycznych z tego panelu.
Rysunek 4.Stężenia w surowicy/osoczu dla każdego analitu w Nr kat. Nr kat. HFIB1-100K od osób zdrowych (n=20), chorych na toczeń rumieniowaty układowy (SLE; n=7), twardzinę układową (n=10), zespół Sjögrena (n=4), reumatoidalnego zapalenia stawów (n=4), mukowiscydozy (n=5), zwłóknienia płuc (n=5) i niealkoholowego stłuszczeniowego zapalenia wątroby (NASH; n=6).
Wyłącznie do użytku badawczego. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych.
Powiązane plakaty
- Multiplex Immunoassay Characterization of 48 Cytokines, Chemokines, and Growth Factors in Colorectal Cancer
- Symultaniczny pomiar 67 biomarkerów immunologicznych, metabolicznych i hormonalnych u naczelnych przy użyciu technologii xMAP® firmy Luminex.®
- In vitro Immunogenicity Assessment Using Fresh PBMCs Isolated From Healthy Donor Whole Blood Samples
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?