About This Item
Kod UNSPSC:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41
Polecane produkty
forma przeciwciała
serum
Poziom jakości
klon
polyclonal
reaktywność gatunkowa
rabbit, vertebrates
metody
immunocytochemistry: suitable
immunohistochemistry: suitable
western blot: suitable
Opis ogólny
Agmatyna sprzężona z BSA
Specyficzność
Agmatyna. Brak wykrywalnej reaktywności krzyżowej z argininą, glutaminianem lub innymi aminokwasami.
Zastosowanie
Immunohistochemia: 1:100 na tkance utrwalonej 0,1-2,5% glutaraldehydem. Optymalne utrwalenie: 0,1-2,5% aldehydu glutarowego, 1% formaldehydu. Minimalna zawartość aldehydu glutarowego: 0,1%. Działa na tkance zatopionej w parafinie (utrwalonej aldehydem glutarowym), ale najlepiej zatopionej w żywicy epoksydowej - specjalnie opracowanej do protokołów po zatopieniu.
Immunocytochemia na komórkach z kanałami jonowymi bramkowanymi glutaminianem.
Immunoblotting
AB1568 został z powodzeniem zastosowany na tkance siatkówki utrwalonej w 2,5% buforze gluteraldehydowym przy użyciu skrawków o długości 250 nm. Warunki testu: Żywe, wyizolowane siatkówki złotych rybek utrzymywano przez 10 minut w natlenionym roztworze fizjologicznym, który zachowuje normalną aktywność neuronów przy stałym oświetleniu. Pożywka zawierała również 10 mM agmatyny. Po okresie inkubacji siatkówki utrwalono w konwencjonalnym 2,5% buforze aldehydu glutarowego i poddano obróbce immunohistochemicznej przy użyciu skrawków o długości 250 nm, sondowanych przeciwciałem drugorzędowym znakowanym złotem. Siatkówki poddane działaniu 125 M kainianu podczas inkubacji. Kainian otwiera zarówno AMPA, jak i kainianowe selektywne kanały jonotropowe, przez które agmatyna może wnikać do komórek.
Optymalne rozcieńczenia robocze muszą być określone przez użytkownika końcowego.
Ogólne przetwarzanie siatkówki lub skrawków mózgu z ładowaniem AGB
Protokół
1. Wyizolować żywe siatkówki lub wyciąć 400 mm plastry mózgu na rozdrabniaczu.
2. Inkubować przez 15 minut w natlenionej pożywce fizjologicznej (oczywiście specyficznej dla gatunku) z 25 mM NaCl zastąpionym AGB i dowolnym odczynnikiem farmakologicznym modulującym przenikanie AGB.
3. Utrwalić w 3% aldehydzie glutarowym w standardowym buforze klasy EM.
4. Osadzić w żywicy epoksydowej i przyciąć skrawki do żądanej grubości.
Immunocytochemia na komórkach z kanałami jonowymi bramkowanymi glutaminianem.
Immunoblotting
AB1568 został z powodzeniem zastosowany na tkance siatkówki utrwalonej w 2,5% buforze gluteraldehydowym przy użyciu skrawków o długości 250 nm. Warunki testu: Żywe, wyizolowane siatkówki złotych rybek utrzymywano przez 10 minut w natlenionym roztworze fizjologicznym, który zachowuje normalną aktywność neuronów przy stałym oświetleniu. Pożywka zawierała również 10 mM agmatyny. Po okresie inkubacji siatkówki utrwalono w konwencjonalnym 2,5% buforze aldehydu glutarowego i poddano obróbce immunohistochemicznej przy użyciu skrawków o długości 250 nm, sondowanych przeciwciałem drugorzędowym znakowanym złotem. Siatkówki poddane działaniu 125 M kainianu podczas inkubacji. Kainian otwiera zarówno AMPA, jak i kainianowe selektywne kanały jonotropowe, przez które agmatyna może wnikać do komórek.
Optymalne rozcieńczenia robocze muszą być określone przez użytkownika końcowego.
Ogólne przetwarzanie siatkówki lub skrawków mózgu z ładowaniem AGB
Protokół
1. Wyizolować żywe siatkówki lub wyciąć 400 mm plastry mózgu na rozdrabniaczu.
2. Inkubować przez 15 minut w natlenionej pożywce fizjologicznej (oczywiście specyficznej dla gatunku) z 25 mM NaCl zastąpionym AGB i dowolnym odczynnikiem farmakologicznym modulującym przenikanie AGB.
3. Utrwalić w 3% aldehydzie glutarowym w standardowym buforze klasy EM.
4. Osadzić w żywicy epoksydowej i przyciąć skrawki do żądanej grubości.
Należy pamiętać, że immunocytochemia po osadzeniu jest zjawiskiem wiązania powierzchniowego i jest niezależna od grubości. Użyj odcinków 40 nm do optymalnego seryjnego pobierania próbek aminokwasów, 90 nm do połączonego pobierania próbek EM/LM, 250 nm do rutynowego pobierania próbek aminokwasów i 500 nm do najłatwiejszych szybkich badań.
5. Używaj AB1568-2000T odpowiednio rozcieńczonego.
6. Przetwarzać z intensyfikacją srebra.
Sugerowany protokół barwienia immunohistochemicznego
Roztwory podstawowe
Etoksyd Na
Bezwodny etanol (EtOH)
Metanol bezwodny (MeOH)
Bufor fosforanowy (0,1 M, pH 7,4) (PB)
PB + 0,05% tiomersal, pH 7,4 (PBT)
NaIO4
Przeciwciało pierwotne (AB1568-2000T)
Kozie przeciwciało anty-Rabbit-gold 1 nm (GAR-gold)
1% surowica kozia w PBT (GSPBT)
Zapas intensyfikacji srebra A - 0,2 M bufor cytrynianowy pH 4,85 (krytyczne pH - sprawdź dokładnie)
Próba intensyfikacji srebra B - 0,5 g hydrochinonu w 15 ml wody destylowanej (dH2O)
Intensyfikacja srebra Zapas C - 1% wodny azotan srebra
Roztwór roboczy do intensyfikacji srebra - 5 mL roztworu podstawowego A + 1 mL roztworu podstawowego B + 1 mL roztworu podstawowego C, w kolejności
5% kwas octowy
5. Używaj AB1568-2000T odpowiednio rozcieńczonego.
6. Przetwarzać z intensyfikacją srebra.
Sugerowany protokół barwienia immunohistochemicznego
Roztwory podstawowe
Etoksyd Na
Bezwodny etanol (EtOH)
Metanol bezwodny (MeOH)
Bufor fosforanowy (0,1 M, pH 7,4) (PB)
PB + 0,05% tiomersal, pH 7,4 (PBT)
NaIO4
Przeciwciało pierwotne (AB1568-2000T)
Kozie przeciwciało anty-Rabbit-gold 1 nm (GAR-gold)
1% surowica kozia w PBT (GSPBT)
Zapas intensyfikacji srebra A - 0,2 M bufor cytrynianowy pH 4,85 (krytyczne pH - sprawdź dokładnie)
Próba intensyfikacji srebra B - 0,5 g hydrochinonu w 15 ml wody destylowanej (dH2O)
Intensyfikacja srebra Zapas C - 1% wodny azotan srebra
Roztwór roboczy do intensyfikacji srebra - 5 mL roztworu podstawowego A + 1 mL roztworu podstawowego B + 1 mL roztworu podstawowego C, w kolejności
5% kwas octowy
Protokół
1. Przekroje 100-1000 nm tkanki zatopionej w żywicy epoksydowej.
2. Deplastyfikować w roztworze 1:5 v/v dojrzałego nasyconego etanolowego NaOH (etanol Na) w bezwodnym EtOH, 1,5 minuty/100 nm grubości skrawka. NIE WODA!
3. Płukanie w trzech 2-minutowych zmianach w bezwodnym EtOH lub MeOH, jedno 5-minutowe płukanie bieżącą wodą z kranu i zanurzenie w dH2O.
4. Przechowywać w PBS do czasu użycia lub zanurzyć w dH2O, wysuszyć na powietrzu i przechowywać.
5. Próbki osmotyczne (np. 1% OsO4 przez 45-60 minut) muszą być traktowane świeżym 1% NaIO4 przez 7 minut, a następnie płukane przez 1 minutę w PBS. Zanurzyć w dH20 i wysuszyć na powietrzu. W przeciwnym razie przejdź do kroku 6.
6. Zanurzyć w dH2O i wysuszyć na powietrzu.
7. Barwić przeciwciałem pierwotnym rozcieńczonym w 1% GSPBT (od 4 godzin do nocy), 25 μL/basenik. Umieścić między warstwami folii, aby zapobiec parowaniu.
8. Usunąć pierwotne przeciwciało. Zanurzyć raz w 0,1 M PBS, aby spłukać nadmiar przeciwciała pierwotnego. Płukać przez godzinę w 1% GSPBT; używać plastikowych kaset, potrzeba około 15 μL roztworu.
9. Zanurzyć szkiełka w dH2O. Szybko osuszyć powietrzem za pomocą pochłaniacza powietrza. Nie dopuścić do dostania się gazu pędnego na szkiełka. Barwić GAR-gold (przeciwciało drugorzędowe) odpowiednio rozcieńczonym w 1% GSPBT przez 1 godzinę. Użyć około 25 μL/basenik.
10. Usunąć przeciwciało drugorzędowe. Zanurzyć w 0,1 M PB, aby spłukać nadmiar drugiego przeciwciała. Płukać w PB przez 1 godzinę w plastikowych kasetach.
11. Zanurzyć w dH2O i wysuszyć na powietrzu.
12. Przygotować świeże roztwory do intensyfikacji srebra.
13. Natychmiast użyć roztworu roboczego, ponieważ działa on tylko przez 10 minut. Użyć 25 μL roztworu/basenik. Pracować szybko. Naświetlaj skrawki roztworem intensyfikującym srebro przez 5-7 minut w ciemnym naczyniu (np. na tacy pokrytej folią aluminiową). Jeśli plama nie jest bardzo silna po 7 minutach, użyj dwóch seryjnych 5-7 minutowych intensyfikacji na następnych próbkach. Do porównań ilościowych należy używać sztywnych protokołów czasowych.
14. Zatrzymać przez krótkie zanurzenie w 5% kwasie octowym.
15. Płukać przez 10 minut w dH2O i wysuszyć w miejscu wolnym od kurzu
16. Pokryć szkiełko żywicą epoksydową.
1. Przekroje 100-1000 nm tkanki zatopionej w żywicy epoksydowej.
2. Deplastyfikować w roztworze 1:5 v/v dojrzałego nasyconego etanolowego NaOH (etanol Na) w bezwodnym EtOH, 1,5 minuty/100 nm grubości skrawka. NIE WODA!
3. Płukanie w trzech 2-minutowych zmianach w bezwodnym EtOH lub MeOH, jedno 5-minutowe płukanie bieżącą wodą z kranu i zanurzenie w dH2O.
4. Przechowywać w PBS do czasu użycia lub zanurzyć w dH2O, wysuszyć na powietrzu i przechowywać.
5. Próbki osmotyczne (np. 1% OsO4 przez 45-60 minut) muszą być traktowane świeżym 1% NaIO4 przez 7 minut, a następnie płukane przez 1 minutę w PBS. Zanurzyć w dH20 i wysuszyć na powietrzu. W przeciwnym razie przejdź do kroku 6.
6. Zanurzyć w dH2O i wysuszyć na powietrzu.
7. Barwić przeciwciałem pierwotnym rozcieńczonym w 1% GSPBT (od 4 godzin do nocy), 25 μL/basenik. Umieścić między warstwami folii, aby zapobiec parowaniu.
8. Usunąć pierwotne przeciwciało. Zanurzyć raz w 0,1 M PBS, aby spłukać nadmiar przeciwciała pierwotnego. Płukać przez godzinę w 1% GSPBT; używać plastikowych kaset, potrzeba około 15 μL roztworu.
9. Zanurzyć szkiełka w dH2O. Szybko osuszyć powietrzem za pomocą pochłaniacza powietrza. Nie dopuścić do dostania się gazu pędnego na szkiełka. Barwić GAR-gold (przeciwciało drugorzędowe) odpowiednio rozcieńczonym w 1% GSPBT przez 1 godzinę. Użyć około 25 μL/basenik.
10. Usunąć przeciwciało drugorzędowe. Zanurzyć w 0,1 M PB, aby spłukać nadmiar drugiego przeciwciała. Płukać w PB przez 1 godzinę w plastikowych kasetach.
11. Zanurzyć w dH2O i wysuszyć na powietrzu.
12. Przygotować świeże roztwory do intensyfikacji srebra.
13. Natychmiast użyć roztworu roboczego, ponieważ działa on tylko przez 10 minut. Użyć 25 μL roztworu/basenik. Pracować szybko. Naświetlaj skrawki roztworem intensyfikującym srebro przez 5-7 minut w ciemnym naczyniu (np. na tacy pokrytej folią aluminiową). Jeśli plama nie jest bardzo silna po 7 minutach, użyj dwóch seryjnych 5-7 minutowych intensyfikacji na następnych próbkach. Do porównań ilościowych należy używać sztywnych protokołów czasowych.
14. Zatrzymać przez krótkie zanurzenie w 5% kwasie octowym.
15. Płukać przez 10 minut w dH2O i wysuszyć w miejscu wolnym od kurzu
16. Pokryć szkiełko żywicą epoksydową.
Postać fizyczna
Frakcja IgG w sterylnym 0,1M buforze fosforanowym. Bez konserwantów.
Przechowywanie i stabilność
Przechowywać w temperaturze 2-8°C w nierozcieńczonych porcjach przez okres do 6 miesięcy od daty otrzymania.
Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności
O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
Kod klasy składowania
12 - Non Combustible Liquids
Klasa zagrożenia wodnego (WGK)
WGK 2
Temperatura zapłonu (°F)
Not applicable
Temperatura zapłonu (°C)
Not applicable
Certyfikaty analizy (CoA)
Poszukaj Certyfikaty analizy (CoA), wpisując numer partii/serii produktów. Numery serii i partii można znaleźć na etykiecie produktu po słowach „seria” lub „partia”.
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.
Nasz zespół naukowców ma doświadczenie we wszystkich obszarach badań, w tym w naukach przyrodniczych, materiałoznawstwie, syntezie chemicznej, chromatografii, analityce i wielu innych dziedzinach.
Skontaktuj się z zespołem ds. pomocy technicznej