17-10220
Biosensor lentiwirusowy LentiBrite RFP-Rad51
Zaloguj sięWyświetlanie cen organizacyjnych i kontraktowych
About This Item
Kod UNSPSC:
12352207
eCl@ss:
34360190
NACRES:
NA.52
Polecane produkty
Opis ogólny
Przeczytaj naszą notę aplikacyjną w Nature Methods!
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
(Kliknij tutaj!</A>)
Dowiedz się więcej o zaletach naszych LentiBrite Lentiviral Biosensors! Kliknij tutaj
Biosensory mogą być używane do wykrywania obecności/braku określonego białka, jak również subkomórkowej lokalizacji tego białka w żywej komórce. Znaczniki fluorescencyjne są często pożądane jako środek do wizualizacji interesującego białka w komórce za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej lub poklatkowego przechwytywania wideo. Wizualizacja żywych komórek bez zakłóceń pozwala badaczom obserwować warunki komórkowe w czasie rzeczywistym.
Systemy wektorów lentiwirusowych są popularnym narzędziem badawczym wykorzystywanym do wprowadzania produktów genowych do komórek. Transfekcja lentiwirusowa ma przewagę nad metodami niewirusowymi, takimi jak transfekcja chemiczna, w tym wyższą wydajność transfekcji komórek dzielących się i nie dzielących się, długotrwałą stabilną ekspresję transgenu i niską immunogenność.
EMD Millipore wprowadza LentiBrite Lentiviral Biosensors, nowy zestaw wstępnie zapakowanych cząstek lentiwirusowych kodujących ważne i podstawowe białka autofagii, apoptozy i struktury komórkowej do wizualizacji w różnych stanach komórkowych/chorobowych w analizie żywych komórek i in vitro.
Cząsteczki LentiBrite RFP-Rad51 firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, umożliwiając analizę na żywo translokacji Rad51 w trudnych do transfekcji typach komórek.
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
(Kliknij tutaj!</A>)
Dowiedz się więcej o zaletach naszych LentiBrite Lentiviral Biosensors! Kliknij tutaj
Biosensory mogą być używane do wykrywania obecności/braku określonego białka, jak również subkomórkowej lokalizacji tego białka w żywej komórce. Znaczniki fluorescencyjne są często pożądane jako środek do wizualizacji interesującego białka w komórce za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej lub poklatkowego przechwytywania wideo. Wizualizacja żywych komórek bez zakłóceń pozwala badaczom obserwować warunki komórkowe w czasie rzeczywistym.
Systemy wektorów lentiwirusowych są popularnym narzędziem badawczym wykorzystywanym do wprowadzania produktów genowych do komórek. Transfekcja lentiwirusowa ma przewagę nad metodami niewirusowymi, takimi jak transfekcja chemiczna, w tym wyższą wydajność transfekcji komórek dzielących się i nie dzielących się, długotrwałą stabilną ekspresję transgenu i niską immunogenność.
EMD Millipore wprowadza LentiBrite Lentiviral Biosensors, nowy zestaw wstępnie zapakowanych cząstek lentiwirusowych kodujących ważne i podstawowe białka autofagii, apoptozy i struktury komórkowej do wizualizacji w różnych stanach komórkowych/chorobowych w analizie żywych komórek i in vitro.
- Wstępnie zapakowane, znakowane fluorescencyjnie za pomocą GFP i RFP
- Wyższa skuteczność transfekcji w porównaniu z tradycyjnymi metodami chemicznymi i innymi metodami transfekcji niewirusowej
- Zdolność do transfekcji dzielących się, nie dzielących się i trudnych do transfekcji typów komórek, takich jak komórki pierwotne lub macierzyste
- Brak zakłóceń funkcji komórkowych
Cząsteczki LentiBrite RFP-Rad51 firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, umożliwiając analizę na żywo translokacji Rad51 w trudnych do transfekcji typach komórek.
Rad51, eukariotyczna rekombinaza podobna do RecA, odgrywa kluczową rolę w homologicznej rekombinacji zachodzącej zarówno w normalnym cyklu komórkowym, jak i w naprawie uszkodzeń DNA. Jednak nadmiar komórkowej Rad51, jak ma to miejsce w wielu nowotworach, prowadzi do oporności na uszkadzające DNA promieniowanie i chemioterapię oraz niestabilności genomu. Po uszkodzeniu DNA generującym podwójne pęknięcia nici, Rad51 łączy się z nukleoplazmy w dyskretne ogniska jądrowe, ale takie ogniska występują również przy braku uszkodzenia DNA, gdy Rad51 ulega nadekspresji. Ekspresja Rad51 połączonego z GFP została wykorzystana do śledzenia dynamiki kompartmentalizacji Rad51 w żywych komórkach.
Cząsteczki LentiBrite RFP-Rad51 firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, umożliwiając analizę translokacji Rad51 w żywych komórkach w trudnych do transfekcji typach komórek.
Cząsteczki LentiBrite RFP-Rad51 firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, umożliwiając analizę translokacji Rad51 w żywych komórkach w trudnych do transfekcji typach komórek.
Zastosowanie
Obrazowanie za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej:
Komórki HeLa umieszczono na szkiełku komorowym i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi w MOI 20 przez 24 godziny. Po wymianie pożywki i 48 godzinach dalszej inkubacji, komórki utrwalono formaldehydem i zamontowano. Obrazy uzyskano za pomocą zanurzeniowej mikroskopii fluorescencyjnej szerokiego pola. RFP-Rad51 wykazuje zmienny punktowy rozkład w jądrze.
Porównanie immunocytochemiczne:
Komórki U2OS umieszczono na szkiełku komorowym i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi w MOI 5 przez 24 godziny. Po 24 godzinach wymieniono pożywkę, a komórki poddano dalszej inkubacji przez 48 godzin. Barwienie immunocytochemiczne (zielone) przeciwciałem poliklonalnym przeciwko Rad51 (nr kat. ABE257) ujawnia podobny wzór ekspresji do RFP-Rad51 (czerwony).
Trudne do transfekcji typy komórek:
Pierwotne typy komórek HUVEC lub HuMSC umieszczono na szkiełkach komorowych i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi RFP-Rad51 w MOI odpowiednio 20 i 5 przez 24 godziny.
Obrazowanie za pomocą mikroskopii konfokalnej:
Komórki U2OS transdukowano lentiwirusem RFP-Rad51. Komórki barwiono FITC-falloidyną w celu uwidocznienia włókien aktyny (kolor zielony) i DAPI w celu uwidocznienia jądra (kolor niebieski). Obrazy uzyskano za pomocą konfokalnej mikroskopii fluorescencyjnej z zanurzeniem w oleju.
Dodatkowy typ komórek:
Traktowano komórki HT1080.
Aby uzyskać optymalną wizualizację fluorescencji, zaleca się analizę docelowego poziomu ekspresji w ciągu 24-48 godzin po transfekcji/infekcji w celu optymalnej analizy żywych komórek, ponieważ intensywność fluorescencji może z czasem słabnąć, szczególnie w trudnych do transfekcji liniach komórkowych. Zainfekowane komórki można zamrozić po udanej transfekcji/infekcji i rozmrozić w hodowli, aby zachować dodatnią ekspresję fluorescencyjną przez ponad 24-48 godzin. Długość i intensywność ekspresji fluorescencyjnej różni się w zależności od linii komórkowej. W przypadku trudnych do transfekcji linii komórkowych może być wymagane wyższe MOI.
Komórki HeLa umieszczono na szkiełku komorowym i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi w MOI 20 przez 24 godziny. Po wymianie pożywki i 48 godzinach dalszej inkubacji, komórki utrwalono formaldehydem i zamontowano. Obrazy uzyskano za pomocą zanurzeniowej mikroskopii fluorescencyjnej szerokiego pola. RFP-Rad51 wykazuje zmienny punktowy rozkład w jądrze.
Porównanie immunocytochemiczne:
Komórki U2OS umieszczono na szkiełku komorowym i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi w MOI 5 przez 24 godziny. Po 24 godzinach wymieniono pożywkę, a komórki poddano dalszej inkubacji przez 48 godzin. Barwienie immunocytochemiczne (zielone) przeciwciałem poliklonalnym przeciwko Rad51 (nr kat. ABE257) ujawnia podobny wzór ekspresji do RFP-Rad51 (czerwony).
Trudne do transfekcji typy komórek:
Pierwotne typy komórek HUVEC lub HuMSC umieszczono na szkiełkach komorowych i transdukowano cząsteczkami lentiwirusowymi RFP-Rad51 w MOI odpowiednio 20 i 5 przez 24 godziny.
Obrazowanie za pomocą mikroskopii konfokalnej:
Komórki U2OS transdukowano lentiwirusem RFP-Rad51. Komórki barwiono FITC-falloidyną w celu uwidocznienia włókien aktyny (kolor zielony) i DAPI w celu uwidocznienia jądra (kolor niebieski). Obrazy uzyskano za pomocą konfokalnej mikroskopii fluorescencyjnej z zanurzeniem w oleju.
Dodatkowy typ komórek:
Traktowano komórki HT1080.
Aby uzyskać optymalną wizualizację fluorescencji, zaleca się analizę docelowego poziomu ekspresji w ciągu 24-48 godzin po transfekcji/infekcji w celu optymalnej analizy żywych komórek, ponieważ intensywność fluorescencji może z czasem słabnąć, szczególnie w trudnych do transfekcji liniach komórkowych. Zainfekowane komórki można zamrozić po udanej transfekcji/infekcji i rozmrozić w hodowli, aby zachować dodatnią ekspresję fluorescencyjną przez ponad 24-48 godzin. Długość i intensywność ekspresji fluorescencyjnej różni się w zależności od linii komórkowej. W przypadku trudnych do transfekcji linii komórkowych może być wymagane wyższe MOI.
Research Category
Apoptosis & Cancer
Apoptosis & Cancer
Research Sub Category
Cell Cycle, DNA Replication & Repair
Cell Cycle, DNA Replication & Repair
Komponenty
TagRFP-Rad51 Lentivirus:
One vial containing 25 µL of lentiviral particles at a minimum of 3 x 10E8 infectious units (IFU) per mL. For lot-specific titer information, please see “Viral Titer” in the datasheet.
Promoter
EF-1 (Elongation Factor-1)
Multiplicty of Infection (MOI)
MOI = Ratio of # of infectious lentiviral particles (IFU) to # of cells being infected.
Typical MOI values for high transduction efficiency and signal intensity are in the range of 20-40. For this target, some cell types may require lower MOIs (e.g., HT-1080, HeLa, U2OS, human mesenchymal stem cells (HuMSC)), while others may require higher MOIs (e.g., human umbilical vein endothelial cells (HUVEC)).
NOTE: MOI should be titrated and optimized by the end user for each cell type and lentiviral target to achieve desired transduction efficiency and signal intensity.
One vial containing 25 µL of lentiviral particles at a minimum of 3 x 10E8 infectious units (IFU) per mL. For lot-specific titer information, please see “Viral Titer” in the datasheet.
Promoter
EF-1 (Elongation Factor-1)
Multiplicty of Infection (MOI)
MOI = Ratio of # of infectious lentiviral particles (IFU) to # of cells being infected.
Typical MOI values for high transduction efficiency and signal intensity are in the range of 20-40. For this target, some cell types may require lower MOIs (e.g., HT-1080, HeLa, U2OS, human mesenchymal stem cells (HuMSC)), while others may require higher MOIs (e.g., human umbilical vein endothelial cells (HUVEC)).
NOTE: MOI should be titrated and optimized by the end user for each cell type and lentiviral target to achieve desired transduction efficiency and signal intensity.
Jakość
Evaluated by transduction of HT-1080 cells and fluorescent imaging performed for assessment of transduction efficiency.
Postać fizyczna
PEG precipitation
Przechowywanie i stabilność
Przechowywanie i obsługa
Lentiwirus jest stabilny przez co najmniej 4 miesiące od daty otrzymania, gdy jest przechowywany w temperaturze -80°C. Po pierwszym rozmrożeniu natychmiast umieścić na lodzie i zamrozić w podwielokrotnościach roboczych w temperaturze -80°C. Zamrożone podwielokrotności mogą być przechowywane przez co najmniej 2 miesiące. Dalsze zamrażanie/rozmrażanie może spowodować zmniejszenie miana wirusa i wydajności transdukcji.
WAŻNA UWAGA DOTYCZĄCA BEZPIECZEŃSTWA
Wektory lentiwirusowe z defektem replikacji, takie jak wektor 3. generacji dostarczony w tym produkcie, nie powodują żadnych chorób u ludzi ani zwierząt. Jednakże, lentiwirusy mogą integrować się z genomem komórki gospodarza i tym samym stwarzać pewne ryzyko mutagenezy insercyjnej. Materiał należy do grupy ryzyka 2 i powinien być obsługiwany pod kontrolą BSL2. Szczegółowe omówienie bezpieczeństwa biologicznego wektorów lentiwirusowych znajduje się w Pauwels, K. et al. (2009). Najnowocześniejsze wektory lentiwirusowe do zastosowań badawczych: Ocena ryzyka i zalecenia dotyczące bezpieczeństwa biologicznego. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
Lentiwirus jest stabilny przez co najmniej 4 miesiące od daty otrzymania, gdy jest przechowywany w temperaturze -80°C. Po pierwszym rozmrożeniu natychmiast umieścić na lodzie i zamrozić w podwielokrotnościach roboczych w temperaturze -80°C. Zamrożone podwielokrotności mogą być przechowywane przez co najmniej 2 miesiące. Dalsze zamrażanie/rozmrażanie może spowodować zmniejszenie miana wirusa i wydajności transdukcji.
WAŻNA UWAGA DOTYCZĄCA BEZPIECZEŃSTWA
Wektory lentiwirusowe z defektem replikacji, takie jak wektor 3. generacji dostarczony w tym produkcie, nie powodują żadnych chorób u ludzi ani zwierząt. Jednakże, lentiwirusy mogą integrować się z genomem komórki gospodarza i tym samym stwarzać pewne ryzyko mutagenezy insercyjnej. Materiał należy do grupy ryzyka 2 i powinien być obsługiwany pod kontrolą BSL2. Szczegółowe omówienie bezpieczeństwa biologicznego wektorów lentiwirusowych znajduje się w Pauwels, K. et al. (2009). Najnowocześniejsze wektory lentiwirusowe do zastosowań badawczych: Ocena ryzyka i zalecenia dotyczące bezpieczeństwa biologicznego. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
Informacje prawne
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
Kod klasy składowania
10 - Combustible liquids
Klasa zagrożenia wodnego (WGK)
WGK 2
Certyfikaty analizy (CoA)
Poszukaj Certyfikaty analizy (CoA), wpisując numer partii/serii produktów. Numery serii i partii można znaleźć na etykiecie produktu po słowach „seria” lub „partia”.
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.
Nasz zespół naukowców ma doświadczenie we wszystkich obszarach badań, w tym w naukach przyrodniczych, materiałoznawstwie, syntezie chemicznej, chromatografii, analityce i wielu innych dziedzinach.
Skontaktuj się z zespołem ds. pomocy technicznej