Cell Counting & Health Analysis

배양 세포는 실험 또는 제조 공정 전에 배가 시간을 모니터링하고 정량화를 위해 계수되어야 합니다. 배양된 세포는 증식뿐 아니라 생존력, 세포독성 및 기타 세포 건강 측정에 대한 일상적인 모니터링이 필요합니다. 분석법의 선택은 배양 세포의 유형, 시험 애플리케이션 및 원하는 처리량에 따라 달라집니다. 전달감염, 게놈 연구, 냉동보존 또는 기타 조작에서 계대배양 또는 다운스트림 사용 이전에 배양된 세포를 정량화하거나 계수하는 것이 중요합니다.    

관련 기술 문서

• Scepter™ 3.0 Handheld Cell Counter
  Scepter™ Cell Counter is a portable device which brings consistency in cell counting right to the culture hood in less than 30 seconds.
• Apoptosis Assays
  Cellular apoptosis assays to detect programmed cell death using Annexin V, Caspase and TUNEL DNA fragmentation assays.
• Scepter™ 3.0 Cell Counter – How it Works
  Scepter™ counting is 7 to 10 times faster than hemocytometry-and also faster than other automated counters. Learn more about how this amazing technology works
• Mycoplasma Detection and Elimination in Cell Culture
  Detect mycoplasma contamination in cell culture through the PCR, DNA stain, or culture tests. Discover mycoplasma prevention, elimination, and detection kits.
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관련 프로토콜

• 세포 생존성 및 증식을 위한 MTT 분석 프로토콜
  세포 생존성, 증식, 세포독성 측정을 위한 MTT 분석 프로토콜. MTT 시약 조제에 대한 지침 및 응용분야 예시.
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수동 세포 계수

Neubauer 그리드가 있는 혈구계와 같은 세포 계수 챔버는 수동/시각적 세포 계수를 위한 일반적인 기기입니다. 세포 현탁액의 소분을 격자가 있는 정밀 연마 유리 기기의 챔버에 적재하면, 모세관 작용에 의해 에칭된 격자 위에서 분산됩니다. 세포는 현미경으로 시각화되고 수동 계수기를 사용하여 계수합니다. 챔버의 사전 정의된 부피 및 그리드 시스템은 세포 농도를 계산하기 위해 사용됩니다. 계수 공정을 자동화하는 이미징 기반 시스템을 사용할 수 있습니다.

자동화 세포 계수

많은 자동 세포 계수 장치는 혈구계수에 사용되는 것과 동일한 시각적 계수 염료 및 원리를 이용합니다. 사물 인식에 의존하는 자동화 세포 계수기와 달리, Coulter 원리를 기반으로 하는 장치는 사용성과 정확성으로 인기를 얻었습니다. Coulter 계수기는 전기 저항의 변화에 따라 세포를 감지하는 센서를 통해 세포 현탁액을 펌프로 공급합니다. 이를 통해 세포, 심지어 작은 세포의 안정적 검출 그리고 고정밀 세포 계수가 가능합니다. 소형(피펫과 유사) 휴대용 모델을 사용하여 배양 후드에서 직접 세포를 계수할 수 있습니다.

세포 생존성 분석법

DNA 합성: 세포에서 활성 DNA 합성을 모니터링하는 것은 일부 세포 증식 분석의 기초입니다. DNA 복제는 항체로 검출되는 방사성 3H-티미딘 또는 비방사성 브로모데옥시우리딘(BrdU)과 같은 변형된 뉴클레오사이드를 통합하여 측정할 수 있습니다.

대사 활동 대사 활동을 측정하는 열량 분석법은 세포 증식, 세포 생존성, 세포독성을 분석하기에 적합합니다. MTT, XTT, WST-1과 같은 테트라졸륨염의 유색 포르마잔 화합물로의 환원은 대사 활동이 있는 세포에서만 발생합니다. ATP의 존재 또한 대사 활동의 표시자입니다. 반딧불이 루시페라제 리포터 분석에서, 분열하는 세포에 의해 생성된 ATP는 D-루시페린을 산화시키는 데 사용되며, 이는 판독값으로 생물발광 광원을 생성합니다.

염료 배제: Trypan Blue 염색은 일반적으로 생존 세포 계수에 사용됩니다. 이 방법은 생존 세포는 염료를 흡수하지 않는 반면 비생존 세포는 염료를 흡수하여 현미경에서 청색으로 보이는 원리에 기반합니다.

형광 세포 생존성 분석법: 5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester(CFSE) 표지법은 세포 집단에서 완료된 세포분열을 측정하기 위해 널리 선택됩니다. 또 다른 막 투과성 염료인 Calcein-AM은 그 자체로는 형광이 아니지만 일단 살아있는 세포에서 가수분해되면 강한 녹색 형광을 방출합니다. 이와 달리, 핵 염료 propidium iodide(PI)는 사멸된 세포의 손상된 막을 통과해야만 핵에 도달할 수 있습니다. Calcein과 PI-DNA 모두 490 nm 광원으로 여기시킬 수 있기 때문에, 단일 여기 형광 현미경으로 생존 세포와 사멸 세포의 동시 모니터링이 가능합니다.