Cell Dissociation Reagents
본래의 환경을 모방하기 위해, 부착성 세포 표현형(예: 상피 세포)은 일반적으로 조직 배양 처리된 표면에 파종되어 생존 및 증식을 위해 부착됩니다. 증식, 계수 및 다운스트림 분석을 위해 부착성 세포 및 고형 조직의 세포를 분리하여 부유액을 생성해야 합니다. 단일 세포 부유액은 세포 계수, 계대배양을 위한 재파종 및 세포 분석법/분석에 필요합니다.
탈착 시약은 자연 발생 효소, 보다 연성인 비효소 대안제제를 포함하거나 또는 칼슘을 킬레이트화하여 카드헤린이 부착되는 것을 방지하여, 세포가 표면으로부터 그리고 서로 간에 방출되도록 합니다. 세포 탈착 시약은 세포외 기질(ECM) 기질에 특이적일 수 있습니다.
자사의 포괄적인 세포 탈착 시약의 제품군은 다음을 포함합니다.
- 트립신: 일반 세포 분리를 위한 동물유래, 재조합 및 StableCell™ 트립신
- Trypsin-EDTA 및 EDTA 용액
- ECM-특이적 콜라게나제, 엘라스타제, 디스파제
- Accumax™ 및 Accutase® 비효소 용액
트립신, 재조합 트립신, StableCell™ 트립신
트립신은 세린 프로테아제이며 부착 세포주와 조직 해리에 사용되는 가장 일반적인 탈착 효소 중 하나입니다. 미가공 트립신 제제는 일반적으로 두 가지 애플리케이션 모두에서 더 효율적인 것으로 밝혀졌지만, 고농도 트립신과 함께 또는 장기간 세포를 배양하면 세포막이 손상될 위험이 있고 세포를 죽일 수 있습니다. 배양된 세포는 EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산)와 함께 트립신으로 처리하여 배양 기질에서 가장 일반적으로 제거되며, 이때 트립신의 농도는 0.025%에서 0.5% 범위일 수 있습니다.
StableCell™ 트립신 용액은 트립신을 분액, 동결 및 해동할 필요 없이 표준 트립신 용액처럼 세포 탈착을 수행하도록 개발되었습니다. 이는 세포 계대배양 또는 실험을 위해 트립신을 분액하고 해동될 때까지 기다릴 필요가 없어 상당한 시간을 절약하고 실험실 냉동고의 소중한 공간을 절약할 수 있습니다. 자사의 StableCell™ 트립신 용액은 2-8°C에서 보관하도록 권장되지만 연구에 따르면 StableCell™ 트립신은 37°C에서 보관할 때도 >90%의 활성과 성능을 유지합니다.
콜라게나제 및 디스파제
콜라게나아제는 천연 삼중 나선 콜라겐의 펩티드 결합을 절단합니다. 천연 콜라겐을 가수분해하는 독특한 능력 때문에 동물 조직에서 세포를 분리하기 위해 광범위하게 사용됩니다. 콜라게나아제는 다양한 미생물과 여러 동물 세포에서 발생합니다. 가장 강력한 것은 혐기성 박테리아인 Clostridium histolyticum이 분비하는 "미가공" 콜라게나제입니다.
디스파제는 빠르고, 효과적이고, 연성이며, 중성인 프로테아제이며 하층으로부터 배양의 손상되지 않은 상피 시트를 분리할 수 있습니다. 디스파제 I은 폐 조직을 소화하고 유동 염색뿐만 아니라 쥐과 CD4 T 세포 분리를 위해 세포를 처리하도록 사용되었습니다.
특수 배양용 탈착 시약
보다 연성인 효소 활성이 필요할 수 있는 세포 및 조직 유형을 해리하거나 탈착하기 위해 Accutase® 및 Accumax™ 용액은 더 낮은 농도에서 효율적인 효소를 사용합니다. 이러한 용액은:
- 배아 및 신경 줄기세포를 효율적으로 분리함
- 부드럽게 탈착하여 세포 생존성을 유지하고 세포 수율을 향상할 수 있음
- 중화를 필요로 하지 않음
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