면역조직화학
Immunohistochemistry (IHC) and Immunofluorescence (IF) Detection Methods
면역조직화학(IHC)은 조직 절편 특정 항원에 결합하는 항체를 이용하는 생화학적 방법입니다. 유사하게, 면역세포화학(ICC)은 개별 세포층에서 항원 식별을 위해 적절합니다. IHC는 암종양에서 발견되는 것과 같은 건강한 그리고 질환 조직 모두에서 발견되는 관심있는 단백질, 탄수화물 및 지질의 가시화를 위해 일반적으로 이용됩니다. 특이적 분자 표지자는 증식 또는 세포사(세포자멸사)와 같은 세포성 사례의 특징입니다. IHC 역시 생체표지자 및 생물학적 조직의 다른 부위에서 다르게 발현되는 단백질의 분배 및 국소화를 이해하기 위한 기초 연구에서 넓게 이용됩니다.
관련 기술 문서
- Nitroblue Tetrazolium (NBT) is used with the alkaline phosphatase substrate 5-Bromo- 4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (BCIP) in western blotting and immunohistological staining procedures. These substrate systems produce an insoluble NBT diformazan end product that is blue to purple in color and can be observed visually.
- Using antibodies in the lab from selection, antibody concentration and antibody storage
- ZooMAb® Antibodies Frequently Asked Questions
- Sigma® Antibody Bioguarantee – Complete peace of mind with your antibody purchase. Exemplary scientific support and a full credit or replacment product if you ar not complete satisfied
- 머크는 특정 응용분야의 요구 사항을 만족하는 항체 및 기타 단백질 결합에 최적화된 광범위한 알칼리성 포스파타아제 효소 및 기질을 제공합니다.
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관련 프로토콜
- Use this protocol to for the entire immunohistochemistry (IHC) procedure through staining and visualization of specific antigens in paraffin-embedded tissue sections.
- In the midst of beeping lab timers, presentations and grant deadlines, it is easy to take for granted the quality of lab reagents.
- One major rationale for investigating the subcellular location of a specific protein is that location is often tightly connected to function. For example, proteins locating to the nucleus are frequently implicated in gene regulation, proteins in mitochondria with energy production and Golgi-related proteins are often associated with protein modification and sorting.
- Prestige Antigens™ and the corresponding Prestige Polyclonals or Monoclonals are recommended to use according to the standard Prestige Antigen-blocking protocol
- We presents a protocol for the Prestige Antibody Immunohistochemistry Procedure. The Prestige Antibodies are subjected to a standardized test procedure using specially designed tissue microarray (TMA) slides.
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IHC 조직 준비, 항체 복원 및 전처리
일반적으로, 조직은 고정되어, 파라핀에 포매되고 IHC 분석을 위해 마이크로톰을 활용하여 절편으로 됩니다. 최초 조직 준비 후 중요한 단계는 항원 복원 필요성입니다. 고정 중 생성된 단백질 교차결합을 절단하여 숨겨진 항원을 노출하기 위해 필요합니다. 항원 에피토프(epitope)의 접근성이 여러 생물학적 요인에 따라서 크게 다양하므로, 항원 복원 및 전처리 조건은 실험적으로 결정되어야 합니다. 예를 들면, 일부 항원은 항체 결합 에피토프를 “노출”하기 위해 좀 더 적극적인 전처리가 필요하지만, 일부 항원에 대해서 전처리가 전혀 필요하지 않을 수 있습니다. 두 가지 일반적인 항원 복원 전처리 방법은 열-유도 에피토프 복원(HIER)을 포함하며, 여기에서 열원은 완충액 및 효소(프로테아제 K)와 함께 사용합니다. 두 번째 방법인, 단백분해-유도 에피토프 복원(PIER)은 또 다른 항원 복원 방법이며, 여기에서 프로테아제 K, 트립신, 키모트립신 또는 펩신과 같은 다양한 프로테아제가 이용될 수 있습니다.
IHC 염색 및 검출
조직 준비 및 항원 복원 전처리 후, 항체-항원 상호작용 가시화는 여러 방법으로 성취할 수 있습니다. 한 가지 일반적인 방법은 색상 발현 반응을 촉매 작용하는 양고추냉이과산화효소 또는 알칼리인산분해효소와 같은 효소에 접합되는 1차 항체를 이용합니다. 대안적으로, 면역형광(IF) 방법은 플루오르세인, 로다민 또는 Alexa Fluor와 같은 형광체에 표지된 항체를 이용합니다. 또 다른 선택사항은 표지된 2차 항체 또는 더 복잡한 검출 시스템에 의한 비간접적 항원 검출과 함께 표지되지 않은 1차 항체를 사용하는 것입니다. 이러한 경우, 1차 및 2차 항체 모두의 최적 역가를 각 분석에 대해 측정해야 합니다.
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