Protein Pull-Down

풀다운 분석은 두 개 이상의 단백질 상호작용을 측정하도록 설계되었습니다. 친화성 풀다운 분석을 사용하여 "미끼" 단백질은 공유 결합 또는 고정 금속 친화성 크로마토그래피(IMAC)와 같은 친화성 태그를 통해 고정 리간드(지지 비즈)에 태그가 부착되고 및 포획됩니다. 일반적인 베이트 단백질 융합 태그에는 글루타티온 S-전이 효소(GST)와 히스티딘 태그 단백질이 사용됩니다. 미끼 단백질은 복합체를 형성하며, 이 복합단백질은 세포 또는 용해된 조직과 같은 단백질 공급원과 함께 배양됩니다. 관심 단백질은 일련의 세척을 통해 비즈 지지대에서 용출되어 원심분리에 의해 수집됩니다. 정제 및 검출 친화성 풀다운 분석은 항원 항체 상호작용이 아니라는 점에서 면역침전법(IP) 및 Co-IP 분석과는 다릅니다. 모든 풀다운 분석에서 정제된 샘플은 추가 다운스트림 분석을 위해 종종 SDS-PAGE, 질량 스펙트럼 분석, 웨스턴 블로팅 검출로 분석됩니다.

• Affinity GST Pull-down Applications
• Co-Immunoprecipitation

Affinity GST Pull-Down Applications

글루타티온 S-전이 효소(GST)는 대부분의 유기체에서 발견되는 211개의 아미노산으로 구성된 단백질입니다. GST는 종종 E. coli 단백질 발현 시스템 내에서 융합 태그를 생성하기 위해 발현 벡터에 통합됩니다. GST 태그는 약 26kDa의 대형 단백질 태그이며 박테리아, 효모, 포유류, 곤충 세포에 발현될 수 있습니다. GST 태그는 재조합 단백질을 세포 내 단백질 분해효소 절단으로부터 보호해야 할 때, 그리고 태그된 단백질의 용해성을 강화해야 할 때 유리하게 작용합니다. 또한 GST 단백질은 순한 용출 조건에서 수행되는 저렴한 친화성 레진을 이용한 풀다운 분석과 쉬운 정제용 고친화성 태그를 제공합니다.

Co-Immunoprecipitation

풀다운 분석은 특정 단백질의 활성화 상태와 함께 알려지지 않은 단백질-단백질 상호작용을 식별하는 탁월한 방법 및 공동 면역침전법의 결과 검증에 이상적입니다. 친화성 풀다운 분석과 달리 IP는 항체를 사용하여 복잡한 생물학적 샘플에서 항원에 결합하여 분리합니다.

Co-IP는 다중단백질 복합체에서 항원과 결합하기 위해 항체를 사용하는 것을 뜻합니다. 그런 다음 복합체는 단백질 A 또는 단백질 G 배지를 첨가하여 포획합니다. 단백질 A/G는 다클론 및 단일클론 IgG형 항체의 Fc 부위와 높은 친화력을 가지고 있어 관심 단백질 복합체의 정제에 중요한 성분입니다. 단백질 풀다운 분석은 단백질-단백질 상호작용 네트워크를 조사하기 위해 필수적인 방법이지만, 특정 방법의 선택은 연구자의 특정 적용 필요에 의해 결정됩니다.