成長制御因子－植物組織培養プロトコル

植物組織培養における植物成長制御因子の重要性は広く実証されています。私たちは特に植物細胞培養で試験済みの植物成長制御因子を各種提供しています。どの製品も物理的特性および化学的特性を評価し、粉末培地の設定基準に従って生物学的試験を行っています。オーキシン製品はいずれもカルス生長や発根の増強に関するin vitro試験を行っています。サイトカイニン製品はいずれもシュート形成刺激に関する試験を行っています。

植物成長制御因子の溶液製品は0.2 µmフィルターを二重にしてろ過滅菌し、滅菌ボトルに入れています。溶液の各ロットは、米国局方第21版の規定に従った無菌性試験を行い、またメルクの植物組織培地基準と同等の基準を用いて植物細胞培養液中で生物学的試験を行っています。

実験、植物組織培地調製、および植物研究を目的とした使用に限ります。開発植物への成長制御因子としては使用しないでください。医薬品、家庭の用途では使用しないでください。

調製・使用

1 mg/mLストック溶液の調製法：植物成長制御因子100 mgを100 mLメスフラスコまたは他のガラス容器に入れます。溶媒2～5 mLを加えて粉末を溶かします。完全に溶けたら、二重処理水（製品番号W3500）で規定容量に希釈します。水を加える際は、粉末が溶液から出ないように、撹拌しながら添加する必要があるかもしれません。ストック溶液は下表の推奨に従って保存してください。ストック溶液1.0 mLを培養液1 Lに加え、培地中の植物成長制御因子の終濃度を1.0 mg/Lにします（下表1～3参照）。

必要なストック溶液の量＝（ホルモン終濃度×培養液の量）／ストック溶液濃度

植物培養細胞で試験済みのオーキシンは通常、植物細胞培養液中の濃度0.01～10.0 mg/Lで使用します。適切な濃度で添加すれば、細胞伸長、組織膨張、細胞分裂、不定根形成、不定芽／脇芽形成の抑制、カルスの誘導と生長、および胚発生誘導を制御してくれるでしょう。

植物培養細胞で試験済みのサイトカイニンは通常、植物細胞培養液中の濃度0.1～10.0 mg/Lで使用します。適切な濃度で添加すれば、細胞分裂を制御し、脇芽／不定芽成長を刺激し、分化を制御し、根形成を抑制し、RNA合成を活性化し、タンパク質および酵素の活性を刺激します。

モル当量および溶液調製についての表

• ・オーキシン
  
• ・サイトカイニン
  
• ・その他の植物成長制御因子

オーキシン

		モル当量		溶液調製
製品名	製品番号	分子量	1 mg/LにおけるµM	溶媒	希釈液	粉末の保管	液体の保管	滅菌 *	作業濃度（mg/L）
p-クロロフェノキシ酢酸 （4-CPA）	C0413	186.6	5.36	EtOH	—	室温	2-8 °C	CA	0.1-10.0
2.4-ジクロロフェノキシ酢酸	D7299	221	4.53	—	—	室温	2-8 °C	CA	0.01-6.0
2.4-ジクロロフェノキシ酢酸 ナトリウム塩	D6679	243	4.12	水	—	室温	2-8 °C	CA	0.01-6.0
インドール-3-酢酸遊離酸 （LAB）	I2886	175.2	5.71	EtOH/1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.01-3.0
インドール-3-酢酸ナトリウム塩	I5148	197.2	5.07	水	水	2-8 °C	-0 °C	CA/F	0.01-3.0
インドール-3-酢酸メチルエステル	I9770	189.2	5.29	—	—	2-8 °C	2-8 °C	—	—
インドール-3-アセチル-L-アスパラギン酸	I9387	290.3	3.45	0.5N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	F	0.01-5.0
インドール-3-酪酸 （IBA）	I5386	203.2	4.90	EtOH/1N NaOH	水	2-8 °C	-0 °C	CA/F	0.1-10.0
インドール-3-酪酸カリウム塩 （K-IBA）	I7512	241.3	4.14	水	—	2-8 °C	-0 °C	CA/F	0.1-10.0
α-ナフタレン酢酸遊離酸（NAA）	N0640	186.2	5.37	1N NaOH	水	室温	2-8 °C	CA	0.1-10.0
β-ナフトキシ酢酸遊離酸（NOA）	N3019	202.2	4.95	1N NaOH	水	室温	2-8 °C	CA	0.1-10.0
フェニル酢酸（PAA）	P6061	136.2	7.34	EtOH	—	室温	2-8 °C	CA/F	0.1-50.0
ピクロラム	P5575	241.5	4.14	DMSO	—	室温	2-8 °C	CA	0.01-10.0
2,4,5-トリクロロフェノキシ酢酸（2,4,5-T）	T5785	255.5	3.91	EtOH	—	室温	2-8 °C	CA	0.01-5.0
2,3,5-トリヨード安息香酸 （TIBA）	T5910	499.8	2.00	1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	F	0.05-5.0

*CA＝他の培地成分とともにオートクレーブ可能F＝ろ過滅菌CA/F＝他の培地成分とともにオートクレーブ可能ですが、若干失活する恐れがあります。成分濃度を上げれば失活分を補うことができます。成分のろ過滅菌が可能です。

サイトカイニン

		モル当量		溶液調製
製品名	製品番号	分子量	1 mg/LにおけるµM	溶媒	希釈液	粉末の保管	液体の保管	滅菌 *	作業濃度（mg/L）
アデニン遊離塩基	A5665	135.1	7.40	1.0 HCl	水	室温	2-8 °C	CA	50-250
アデニン ヘミ硫酸塩	A2545	184.2	5.43	水	—	室温	2-8 °C	CA	50-250
6-ベンジルアミノプリン（BA）	B3408	225.3	4.44	1N NaOH	水	室温	2-8 °C	CA/F	0.1-5.0
6-ベンジルアミノプリン塩酸塩	B5920	261.7	3.82	水	—	室温	2-8 °C	CA/F	0.15.0
6-ベンジルアミノプリン（BA）	B3274	225.3	4.44	1N NaOH	水	室温	2-8 °C	CA/F	0.1-5.0
N-Benzyl-9-(2-tetrahydropyranyl)adenine (BPA)	B2275	309.4	3.23	EtOH	—	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.1-5.0
N-(2-Chloro-4-pyridyl)-N'-phenylurea (4-CPPU)	C2791	247.7	4.04	DMSO	—	2-8 °C	2-8 °C	F	0.001-1.0
6-(gamma,gamma-Dimethylallylamino)purine (2iP)	D7674	203.2	4.92	1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	CA/F	1.0-30.0
6-(gamma,gamma-Dimethylallylamino)purine (2iP)	D5912	203.2	4.92	1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	CA/F	1.0-30.0
1,3-ジフェニル尿素 （DPU）	D7535	212.3	4.71	DMSO	—	室温	2-8 °C	F	0.1-1.0
キネチン	K0753	215.2	4.65	1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.1-5.0
キネチン	K3378	215.2	4.65	1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.1-5.0
キネチン	K3253	215.2	4.65	1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.1-5.0
キネチン 塩酸塩	K1885	251.7	3.97	水	—	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.1-5.0
1-Phenyl-3-(1,2,3-thiadiazol-5-yl)urea	P6186	220.2	4.54	DMSO	—	室温	2-8 °C	CA/F	0.001-0.05
trans-ゼアチン 遊離塩基	Z0876	219.2	4.56	1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.01-5.0
ゼアチン	Z0164	219.2	4.56	1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.01-5.0
trans-ゼアチン 塩酸塩	Z2753	255.7	3.91	水	—	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.01-5.0
trans-ゼアチン リボシド	Z3541	351.4	2.85	1N NaOH	水	-0 °C	-0 °C	F	0.01-5.0

*CA＝他の培地成分とともにオートクレーブ可能F＝ろ過滅菌CA/F＝他の培地成分とともにオートクレーブ可能ですが、若干失活する恐れがあります。成分濃度を上げれば失活分を補うことができます。成分のろ過滅菌が可能です。

・その他の植物成長制御因子

		モル当量		溶液の調製
製品名	製品番号	分子量	1 mg/LにおけるµM	溶媒	希釈液	粉末の保管	液体の保管	滅菌	作業濃度（mg/L）
（±）-cis,trans-アブシシン酸（ABA）	A1049	264.3	3.78	1N NaOH	Water	-0 °C	-0 °C	CA/F	0.1-10.0
アンシミドール	A9431	256.3	3.90	DMSO	—	2-8 °C	-0 °C	CA/F	1.0-10.0
塩化クロロコリン（CCC）	C4049	158.1	6.33	水	—	室温	2-8 °C	F	最大500
3,6-ジクロロ-o-アニス酸 （ジカンバ）	D5417	221.0	4.52	EtOH/Water	—	2-8 °C	2-8 °C	F	0.01-10.0
ジベレリン酸（GA3）	G7645	346.4	2.89	EtOH	—	室温	2-8 °C	CA/F	0.01-5.0
ジベレリン酸 カリウム塩（K-GA3）	G1025	384.5	2.60	水	—	2-8 °C	-0 °C	CA/F	0.01-5.0
ジベレリン A4 遊離酸 （GA4）	G7276	332.4	3.01	EtOH	—	-0 °C	-0 °C	F	0.01-5.0
（±）-ジャスモン酸	J2500	210.3	4.76	EtOH	—	2-8 °C	-0 °C	F	0.01-100.0
フロログルシノール	P1178	126.1	7.93	水	—	室温	2-8 °C	CA/F	最大162
N-（ホスホノメチル）グリシン（グリホサート）	P9556	169.1	5.91	1N NaOH	水	室温	2-8 °C	F	—
コハク酸 2,2-ジメチルヒドラジド	S2022	160.2	6.24	水	—	2-8 °C	2-8 °C	CA/F	0.1-10.0

*CA＝他の培地成分とともにオートクレーブ可能F＝ろ過滅菌CA/F＝他の培地成分とともにオートクレーブ可能ですが、若干失活する恐れがあります。成分濃度を上げれば失活分を補うことができます。成分のろ過滅菌が可能です。