DUO92014
Reagenti verdi Duolink® per rilevamento in situ
Sinonimo/i:
in situ Proximity Ligation Assay reagent, Protein Protein Interaction Assay reagent
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About This Item
Codice UNSPSC:
12352200
NACRES:
NA.32
Prodotti consigliati
Nome Commerciale
Duolink®
Livello qualitativo
tecniche
proximity ligation assay: suitable
Fluorescenza
λex 495 nm; λem 527 nm (green) (FITC (Cyanine 2), Zeiss Filter set 38)
Compatibilità
suitable for fluorescence
Condizioni di spedizione
dry ice
Temperatura di conservazione
−20°C
Descrizione generale
Il Duolink® In Situ Detection Reagents Green contiene tutti i reagenti per effettuare il test Duolink In situe serve per l′amplificazione e la rivelazione delle sonde PLA® legate. Le sonde di rivelazione contengono un fluoroforo (eccitazione a 495 nm ed emissione a 527 nm) visualizzabile con lo stesso filtro per Cy®2 o FITC. Esperimenti condotti impiegando reagenti Duolink in situ possono rilevare e visualizzare interazioni tra proteine, livelli di espressione proteica e modifiche post-traduzionali a livello di una singola molecola in cellule e campioni di tessuto fissati.
Specificità
I reagenti di rivelazione con fluorescenza verde sono spesso impiegati con filtro FITC.
Applicazioni
Il saggio di ligazione per prossimità (PLA®)Duolink®, consente il rilevamento endogeno di interazioni proteiche, modificazioni post-traduzionali e analisi dell′ espressione proteica a livello di singola molecola, in cellule e campioni di tessuto fissati.
Duolink® In Situ Detection Reagents è stato utilizzato nel saggio di ligazione di prossimità di:
- vasopressina e ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRH) da sezioni cervello di ratto congelate
- cellule renali embrionali umane 293 (HEK)
- tessuti ipofisiari
Caratteristiche e vantaggi
- Non è necessaria alcuna sovraespressione o manipolazione genetica
- Elevata specificità (meno falsi positivi)
- Sensibilità a livello di singola molecola, grazie all′amplificazione a cerchio rotante
- Quantificazione relativa possibile
- Non richiede un′apparecchiatura particolare
- Più rapida e più semplice della FRET
- Maggiore accuratezza rispetto alla co-immunoprecipitazione (co-IP)
- Risultati pronti per la pubblicazione
Componenti
- Ligazione, 5 pz. Contiene oligonucleotidi che si ibridano con le sonde PLA e tutti i componenti necessari per la ligazione fatta eccezione per la Ligasi
- Ligasi, 1 pz. (1 unità/μL)
- Polimerasi, 1 pz (10 unità/μL)
- Amplificazione verde, 5 pz. - Contiene tutti i componenti necessari alla replicazione a cerchio rotante (RCA) ad eccezione della Polimerasi. Contiene anche le sonde per gli oligonucleotidi marcate con un fluoroforo che si ibridizzano con il prodotto della RCA.
Non inclusi nel kit di rivelazione:
Anticorpi primari, sonde PLA, tamponi di lavaggio, terreno di montaggio
Nota sulla preparazione
Per eseguire un esperimento di PLA in situ Duolink® completo sono necessari due anticorpi primari (convalidati per PLA, IHC, ICC o IF) che riconoscano due epitopi bersaglio. Altri reagenti necessari sono un paio di sonde PLA da specie differenti (una PLUS e una MINUS), reagenti di rivelazione, tamponi di lavaggio e un terreno di montaggio. Tenere presente che gli anticorpi primari devono provenire dalla stessa specie delle sonde PLA Duolink®. L′analisi si effettua con l′attrezzatura comunemente utilizzata per l′immunofluorescenza.
Stoccaggio e stabilità
conservare i componenti a –20 °C. Gli enzimi dovrebbero sempre essere tenuti freddi (–20 °C) usando un blocco di congelamento quando si rimuovono dal congelatore.
Altre note
Per l′impiego del prodotto, seguire il protocollo per la fluorescenza in situ Duolink®. È disponibile anche una serie di istruzioni brevi.
Per informazioni su come eseguire un esperimento Duolink®, per consultare le applicazioni, le istruzioni per la risoluzione dei problemi e altro ancora, si rimanda al nostro Centro delle risorse per PLA Duolink®.
Lasciaci lavorare per te, scopri il nostro Programma di assistenza ai clienti pensato per velocizzare il tuo progetto Duolink®
Visualizza l′elenco completo dei prodotti Duolink®
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Note legali
Cy is a registered trademark of Cytiva
Duolink is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
PLA is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Avvertenze
Danger
Indicazioni di pericolo
Consigli di prudenza
Classi di pericolo
Resp. Sens. 1
Codice della classe di stoccaggio
10 - Combustible liquids
Certificati d'analisi (COA)
Cerca il Certificati d'analisi (COA) digitando il numero di lotto/batch corrispondente. I numeri di lotto o di batch sono stampati sull'etichetta dei prodotti dopo la parola ‘Lotto’ o ‘Batch’.
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This page details the Duolink® In Situ Short Protocol for fluorescence detection
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