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DUO92005

Sigma-Aldrich

Sonda in situ PLA® Duolink® Anti-coniglio MINUS

Sinonimo/i:

in situ Proximity Ligation Assay reagent, Protein Protein Interaction Assay reagent

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About This Item

Codice UNSPSC:
12352203
NACRES:
NA.32

Origine biologica

donkey (polyclonal)

Livello qualitativo

Forma dell’anticorpo

affinity purified immunoglobulin (secondary antibody)

Tipo di anticorpo

primary antibodies

Nome Commerciale

Duolink®

Reattività contro le specie

rabbit

tecniche

immunofluorescence: suitable
proximity ligation assay: suitable

Compatibilità

suitable for brightfield
suitable for fluorescence

Condizioni di spedizione

wet ice

Temperatura di conservazione

2-8°C

Applicazioni

Il saggio di ligazione di prossimità (PLA®)Duolink® , consente il rilevamento endogeno di interazioni proteiche, modifiche post-traduzionali e livelli di espressione proteica a livello della singola molecola in cellule e campioni di tessuto fissati.

A seconda dei reagenti di rilevamento usati, si può applicare il prodotto al Protocollo di fluorescenza in situ Duolink® e al Protocollo in campo chiaro in situ Duolink®.

Per informazioni su come eseguire un esperimento Duolink®, per le applicazioni, la risoluzione dei problemi e altro, visitare il Centro risorse PLA Duolink®.

Per eseguire un esperimento PLA in situ Duolink® completo saranno necessari due anticorpi primari (convalidati per PLA, IHC, ICC o IF) che riconoscano due epitopi bersaglio. Altri reagenti necessari sono un paio di sonde PLA da specie differenti (una PLUS e una MINUS), reagenti di rivelazione, tamponi di lavaggio e un terreno di montaggio. Tenere presente che gli anticorpi primari devono provenire dalla stessa specie delle sonde PLA Duolink®. L′analisi si effettua con un′attrezzatura standard per prove di immunofluorescenza. Per la rilevazione in campo chiaro è disponibile anche l′HRP.

Specificità
La sonda PLA anti-coniglio reagisce con la molecola intera di IgG di coniglio e con le catene leggere di altre immunoglobuline′di coniglio. La sonda PLA anti-coniglio ha una minima reattività incrociata con le proteine seriniche bovine, di pollo, capra, cavie, criceto siriano, cavallo, umane, di topo, ratto e pecora. Insieme con questo prodotto si deve usare una sonda PLUS di una specie differente. Per maggiori informazioni visitare la Guida alla scelta dei prodotti.

Nota applicativa
Sono necessari due anticorpi primari prodotti in specie diverse. Analizzare gli anticorpi primari (classe IgG, mono o policlonali) in un saggio standard di immunofluorescenza (IF), immunoistochimica (IHC) o immunocitochimica (ICC) per determinare la fissazione, il blocco e le condizioni di titolazione ottimali. I reagenti PLA in situ Duolink® sono idonei all′uso su cellule fissate, cellule da centrifuga, cellule cresciute su vetrino, fissate in formalina, incluse in paraffina (FFPE), o su tessuto (fresco o congelato). Non è richiesto un numero minimo di cellule.

Facciamo volentieri il lavoro in sua vece: per velocizzare i suoi progetti Duolink® troverà ulteriori informazioni nel Programma di assistenza personalizzato

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Specificità
La sonda per PLA anti-coniglio reagisce con l′intera molecola di IgG di coniglio e con le catene leggere di altre immunoglobuline di coniglio. La sua reattività crociata con le proteine sieriche bovine, di pollo, capra, cavia, criceto siriano, cavallo, umane, di topo, ratto e pecora è minima. Contemporaneamente a questo prodotto si deve usare una sonda PLUS di una specie differente. Per maggiori informazioni, si rimanda alla Guida alla scelta del prodotto.

Suggerimenti in merito alle applicazioni
Sono necessari due anticorpi primari ottenuti in specie diverse. Testare gli anticorpi primari (IgG, mono o policlonali) mediante un saggio standard di immunofluorescenza (IF), immunoistochimica (IHC) o immunocitochimica (ICC) per determinare le condizioni ottimali di fissazione, blocking e titolo. I reagenti per PLA in situ Duolink® sono idonei all′uso su cellule fissate, preparazioni cytospin, cellule cresciute su vetrino, fissate in formalina, incluse in paraffina (FFPE) oppure su tessuti (freschi o congelati). Non è necessario disporre di un numero minimo di cellule.

Lasciateci lavorare per voi, scoprite il nostro Programma di assistenza ai clienti pensato per velocizzare i vostri progetti Duolink®

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Caratteristiche e vantaggi

  • Non è necessaria alcuna sovraespressione o manipolazione genetica
  • Elevata specificità (meno falsi positivi)
  • Sensibilità alla singola molecola grazie alla replica a cerchio rotante.
  • Possibile quantifica relativa
  • Non richiede apparecchiatura speciale
  • Più rapida e più semplice della FRET
  • Maggiore accuratezza rispetto alla co-immunoprecipitazione (co-IP)
  • Risultati pronti per la pubblicazione

Componenti

Il prodotto comprende quanto segue:
  • Sonde 5x PLA Anti-coniglio MINUS - Anticorpo asinino secondario anti-coniglio coniugato con oligonucleotide MINUS
  • 1 soluzione di blocco, reagente per bloccare il campione
  • 1 diluente dell′anticorpo - per la diluizione delle sonde PLA e degli anticorpi primari
Per maggiori informazioni vedere la scheda tecnica.

Note legali

Duolink is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
PLA is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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Codice della classe di stoccaggio

10 - Combustible liquids


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Roberto Di Maio et al.
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Missense mutations in leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) cause familial Parkinson's disease (PD). However, a potential role of wild-type LRRK2 in idiopathic PD (iPD) remains unclear. Here, we developed proximity ligation assays to assess Ser1292 phosphorylation of LRRK2 and, separately
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Hypoxia inducible factor 1α (HIF1α) is a master regulator leading to metabolic adaptation, an essential physiological process to maintain the survival of stem cells under hypoxia. However, it is poorly understood how HIF1α translocates into the nucleus in stem cells
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BMC molecular biology, 13, 7-7 (2012-03-13)
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Reversible protein modification by small ubiquitin-like modifiers (SUMOs) is critical for eukaryotic life. Mass spectrometry-based proteomics has proven effective at identifying hundreds of potential SUMO target proteins. However, direct identification of SUMO acceptor lysines in complex samples by mass spectrometry

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Protocolli

This protocol describes the use of Duolink® PLA reagents for the brightfield detection, visualization, and quantification of individual proteins, protein modifications, and protein interactions in tissue and cell samples.

Protocol for use of Duolink® PLA reagents for the detection of individual proteins, protein modifications, and protein-protein interactions within cell populations by flow cytometry.

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