17-614
Set di anticorpi monoclonali di coniglio anti-trimetil-istone H3 (Lys4) ChIPAb+ convalidati per ChIP e primer
from rabbit
Sinonimo/i:
Chip Rabbit Antibody and primer set, H3K4me3 ChIP, H3K4me3, Histone H3 (tri methyl K4), Histone H3K4me3, Histone H3K4me3 ChIP
About This Item
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Origine biologica
rabbit
Livello qualitativo
Clone
monoclonal
Reattività contro le specie
mouse, human
Reattività contro le specie (prevista in base all’omologia)
mammals
Produttore/marchio commerciale
ChIPAb+
Upstate®
tecniche
ChIP: suitable (ChIP-seq)
western blot: suitable
Isotipo
IgG
N° accesso NCBI
N° accesso UniProt
Condizioni di spedizione
dry ice
Informazioni sul gene
human ... H3F3B(3021)
Descrizione generale
Il set trimetil-istone H3 (Lys4) ChIPAb+ comprende l'anticorpo anti-trimetil-istone H3 (Lys4), un anticorpo di controllo negativo (siero di coniglio normale) e i primer per qPCR che amplificano una regione di 166 coppie di basi del promotore del gene GAPDH umano. Gli anticorpi anti-trimetil-istone H3 (Lys4) e di controllo negativo sono forniti in un formato di reazione "per ChIP" scalabile e possono essere utilizzati per convalidare funzionalmente la precipitazione della cromatina associata al trimetil-istone H3 (Lys4).
Specificità
Immunogeno
Applicazioni
la cromatina sonicata ottenuta da cellule U2OS 3 x 106 equivalenti di cellule per IP) non trattate o trattate con luce UV (6 h, 50 joule/m2) è stata immunoprecipitata utilizzando 3 μL di anticorpo anti-trimetil istone H3 (Lys4) di coniglio e il kit Magna ChiP A (N° Cat. 17-610). L′immunoprecipitazione dei frammenti di DNA associati al trimetil istone H3 (Lys4) è stata verificata mediante qPCR utilizzando i primer per ChIP specifici per p21 che fiancheggiano il promotore di p21 umano contenente un sito di legame con il fattore Sp1 (vedere le figure).
Il fold increase è il rapporto tra le quantità IP medie normalizzate estratte dalle curve standard derivate dagli input di ciascun campione di cromatina. La capacità di immunoprecipitazione del trimetil istone H3 (Lys4) associata a questo promotore aumenta con il trattamento UV, come osservato in altri studi.
Per i dettagli sperimentali, consultare i protocolli del kit A EZ-Magna ChIP (N° Cat. 17-408) o EZChIP (N° Cat. 17-371).
Saggio di ChIP-seq:
l′immunoprecipitazione della cromatina è stata eseguita utilizzando il kit Magna ChIP HiSens (N° Cat. 17-10460), 3 µL di anticorpo anti-trimetil istone H3 (Lys4) (N° Cat. 17-614) o 20 µL di sferette con Proteina A/G e cromatina trattata con formaldeide (crosslinked) ottenuta da 1x10^6 cellule HeLa, seguita da purificazione del DNA su sferette magnetiche. Le librerie sono state preparate da campioni di DNA input e ChIP usando protocolli standard con adattatori Illumina contrassegnati da codici a barre e analizzati nello strumento Illumina HiSeq. È stato mappato un eccesso di otto milioni di reads dai file FastQ usando il sistema di allineamento Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml) dopo rimozione dei tag con TagDust (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/). I picchi sono stati identificati usando MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/) e i picchi e i reads sono stati visualizzati sotto forma di track personalizzata sul Genome Browser dell′UCSC (http://genome.ucsc.edu) da file nei formati BigWig e BED. I picchi più alti identificati nel set di dati 17-614 e 07-473, corrispondenti al 25% dei campioni, hanno mostrato una sovrapposizione del 99% con i picchi identificati nel track H3K4me3 BROAD Histone di ENCODE per la linea cellulare HeLa S3.
Saggio di Western blotting e di inibizione con peptide:
blot rappresentativo. L′estratto acido di cellule HeLa è stato risolto mediante elettroforesi, trasferito su nitrocellulosa e identificato con anticorpo anti-trimetil istone H3 (Lys4) (diluizione 1:2.000, corsia 1), oppure preincubato con peptide dell′istone H3 0,4 μM con le seguenti modifiche: corsia 2, monometil-lisina 4; corsia 3, dimetil-lisina 4; corsia 4, trimetil-lisina 4.
Le proteine sono state visualizzate utilizzando un anticorpo secondario di capra anti-coniglio coniugato con HRP e rivelate in chemiluminescenza
(vedere le figure).
Epigenetica & funzione nucleare
Biologia della cromatina
Confezionamento
Componenti
IgG di coniglio controllo negativo per ChiP, 1 microprovetta
Primer per ChiP specifici per GAPDH, 1 microprovetta
Qualità
la cromatina sonicata ottenuta da cellule HeLa non trattate (1 x 106 equivalenti di cellule) è stata immunoprecipitata utilizzando 3 μL di IgG di coniglio normale o 3 μL di IgG monoclonali anti-trimetil istone H3 (Lys4) e il kit Magna ChIP A (N° Cat. 17-610). L'avvenuta immunoprecipitazione dei
frammenti di DNA associati al trimetil-istone H3 (Lys4) è stata verificata mediante qPCR utilizzando primer di controllo per ChiP che fiancheggiano il promotore del gene GAPDH umano (vedere le figure). Per i dettagli sperimentali, consultare il protocollo del kit EZ-Magna ChIP A.
Descrizione del bersaglio
Stato fisico
IgG di coniglio normale. Una microprovetta contenente 75 μL di IgG di coniglio normale.
Primer di controllo. Una microprovetta contenente 75 μL di ciascun primer specifico per il gene GAPDH umano a una concentrazione 5 μM.
FOR: TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA
Stoccaggio e stabilità
Risultati analitici
Comprende un anticorpo di controllo negativo costituito da IgG di coniglio purificate e primer di controllo specifici per il promotore di GAPDH umana.
Note legali
Esclusione di responsabilità
Codice della classe di stoccaggio
10 - Combustible liquids
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