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17-10264

Sigma-Aldrich

Set ChIPAb+ JHDM1B

from rabbit, purified by affinity chromatography

Sinonimo/i:

JMJD, Lysine (K)-specific demethylase 2B, F-box protein FBL10, [Histone-H3]-lysine-36 demethylase 1B, JEMMA (Jumonji domain, EMSY-interactor, methyltransferase motif) protein, F-box and leucine-rich repeat protein 10, Protein containing CXXC domain 2, Ju

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About This Item

Codice UNSPSC:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.32

Origine biologica

rabbit

Livello qualitativo

Clone

polyclonal

Purificato mediante

affinity chromatography

Reattività contro le specie

horse, mouse, pig, human

Reattività contro le specie (prevista in base all’omologia)

porcine (based on 100% sequence homology), equine (based on 100% sequence homology), chimpanzee (based on 100% sequence homology), rat (based on 100% sequence homology), rabbit (based on 100% sequence homology)

Produttore/marchio commerciale

ChIPAb+
Upstate®

tecniche

ChIP: suitable
dot blot: suitable
western blot: suitable

N° accesso NCBI

N° accesso UniProt

Condizioni di spedizione

dry ice

Informazioni sul gene

human ... KDM2B(84678)

Descrizione generale

JHDM1B (jumonji domain-containing histone demethylation protein 1B o proteina 1B di demetilazione istonica contenente il dominio jumonji) e KDM2B. Per via della presenza di un motivo F-box, questa proteina è anche nota con il nome FBXL 10 (F-box/LRR-repeat protein 10). Questa proteina agisce come una demetilasi istonica per la lisina 36 dell'istone H3 e induce la demetilazione preferenziale della lisina 3 dimetilata, ma ha un'attività scarsa o nulla sulla lisina 36 dell'istone H3 mono- e trimetilata.
Tutti gli anticorpi ChIPAb+ vengono singolarmente convalidati per confermare la precipitazione della cromatina, ogni lotto, sempre. Il set di anticorpi ChIPAb+ include primer di controllo (ogni lotto testato mediante qPCR) per convalidare biologicamente i tuoi risultati di IP in un contesto locus-specifico. Per permettere ai ricercatori di convalidare i protocolli di ChIP quando usano i nostri anticorpi nel loro specifico contesto cromatinico, si forniscono anche il protocollo della qPCR e le sequenze dei primer. Ogni set include anche un anticorpo di controllo negativo per verificare la specificità della reazione di ChIP.
Il set ChIPAb+JHDM1B include l′anticorpo anti-JHDM1B, IgG di coniglio normale e i primer di controllo che amplificano una regione di 110 pb dei primer per ChIP specifici per la β-globina umana. L′anticorpo anti-JHDM1B e i controlli negativi sono forniti in un formato di reazione "per ChIP" scalabile e si possono usare per convalidare funzionalmente la precipitazione della cromatina associata a JHDM1B.

Immunogeno

Peptide lineare coniugato con KLH corrispondente alla proteina JHDM1B umana.

Applicazioni

Categoria di ricerca
Epigenetica & funzione nucleare
Immunoprecipitazione della cromatina:
dati ottenuti con un lotto rappresentativo.
La cromatina sonicata preparata da cellule HeLa (equivalenti a 1 X 10E6 cellule/IP) è stata immunoprecipitata usando 2 µL di IgG di coniglio normale o l′anticorpo anti-JHDM1B e il kit Magna ChIP A (N° Cat. 17-610). La riuscita dell′immunoprecipitazione dei frammenti di DNA associati a JHDM1B è stata confermata mediante qPCR utilizzando i primer per ChIP specifici per il promotore della β-globina umana come locus positivo e i primer specifici per il promotore della β-actina come locus negativo (Figura 2). I dati sono presentati come input percentuale di ciascun campione IP rispetto all′input di cromatina per ciascun amplicone e campione CHIP come indicato.
Per la descrizione dell'esperimento, consultare il protocollo del kit EZ-Magna ChIP A (N° Cat. 17-408) o EZ-ChIP (N° Cat. 17-371).
Saggio di Western blotting:
dati ottenuti da un lotto rappresentativo.
L'estratto nucleare di cellule HeLa è stato incubato con l'anticorpo anti-JHDM1B (1 µg/mL). Le proteine sono state visualizzate mediante un anticorpo secondario costituito da IgG di asino anti-coniglio coniugate con HRP e un sistema di rivelazione per chemiluminescenza.
La freccia indica la proteina JHDM1B (~165 kDa) (Figura 3). In alcuni lisati, a ~109 kDa compare una banda non caratterizzata.
Saggio immunocitochimico:
dati ottenuti con un lotto rappresentativo.
Analisi al microscopio confocale a fluorescenza di cellule NIH/3T3 e HeLa incubate con l'anticorpo anti-JHDM1B (rosso). I filamenti di actina sono stati marcati con il colorante AlexaFluor 488-falloidina (verde). Il nucleo è colorato con DAPI (blu). Questo anticorpo colora positivamente il nucleo (Figura 4).
Questa pratica combinazione di anticorpo ChIPAb+JHDM1B convalidato & set di primer include l′anticorpo e gli specifici primer di controllo per la PCR.
Sotto categoria di ricerca
Istoni

Confezionamento

25 analisi per set. Uso raccomandato: 1,4 μg (2 μL) di anticorpo per ciascuna immunoprecipitazione cromatinica (a seconda del contesto biologico).

Qualità

Immunoprecipitazione della cromatina:
dati ottenuti da un lotto rappresentativo.
La cromatina sonicata preparata da cellule HeLa (equivalenti a 1 X 10E6 cellule/IP) è stata immunoprecipitata usando 2 µL di IgG di coniglio normale o di anticorpo anti-JHDM1B e il kit Magna ChIP® A (N° Cat. 17-610). La riuscita dell′immunoprecipitazione dei frammenti di DNA associati a JHDM1B è stata confermata mediante qPCR utilizzando i primer per ChIP specifici per il promotore della β-globina umana (Figura 1).
Per la descrizione dell'esperimento, consultare il protocollo del kit EZ-Magna ChIP A (N° Cat. 17-408) o EZ-ChIP (N° Cat. 17-371).

Descrizione del bersaglio

Visualizzato a ~165 kDa. In alcuni lisati si può osservare una banda di peso molecolare inferiore non caratterizzata.

Stato fisico

Componenti:
anti-JHDM1B (policlonale di coniglio). Una microprovetta contenente 50 µL di IgG policlonali purificate di coniglio in tampone contenente Tris-glicina 0,1 M (pH 7,4), NaCl 150 mM e azoturo di sodio 0,05%, prima dell′aggiunta di glicerolo portato al 30%. Conservare a -20 °C.
Concentrazione: 0,7 mg/mL
IgG di coniglio normale. Una microprovetta contenente 125 µg di IgG di coniglio in 125 µL di tampone per la conservazione contenente azoturo di sodio 0,05%. Conservare a -20°C.
Primer per ChIP specifici per il promotore della β-globina umana. Una microprovetta contenente 75 μL di ciascuno dei primer (5 μM) specifici per il promotore della β-globina umana. Conservare a -20 °C.
FOR: AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
REV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC
Purificazione per affinità

Stoccaggio e stabilità

Stabile per 1 anno a -20 °C dalla data di ricevimento. Raccomandazioni per la manipolazione: Dopo il primo scongelamento, prima di rimuovere il tappo, centrifugare il contenitore e mescolare delicatamente la soluzione. Suddividere in aliquote in provette per microcentrifuga e conservare a -20°C. evitare ripetuti cicli di congelamento e scongelamento che potrebbero danneggiare le IgG e compromettere le prestazioni del prodotto.
N.B.: oscillazioni di temperatura del congelatore al di sotto dei -20°C possono causare il congelamento delle soluzioni contenenti glicerolo.

Risultati analitici

Controllo
Include IgG di coniglio normale e i primer specifici per il promotore della β-globina umana.

Altre note

Concentrazione: per la concentrazione specifica del lotto, fare riferimento al Certificato di Analisi.

Note legali

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Codice della classe di stoccaggio

12 - Non Combustible Liquids

Punto d’infiammabilità (°F)

Not applicable

Punto d’infiammabilità (°C)

Not applicable


Certificati d'analisi (COA)

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