Elettroforesi su gel degli acidi nucleici
L’elettroforesi su gel degli acidi nucleici è una tecnica di biologia molecolare che consente la separazione, l'identificazione e la purificazione di frammenti di DNA e RNA in base alle dimensioni e alla carica. In questa tecnica, le molecole di DNA e RNA vengono separate applicando un campo elettrico che fa muovere gli acidi nucleici caricati negativamente attraverso una matrice di gel di agarosio o di poliacrilammide.
La matrice del gel agisce come un setaccio, che consente alle molecole più corte di muoversi più rapidamente rispetto alle molecole più lunghe attraverso i pori del gel.
- I gel di agarosio sono quelli più comunemente usati per l'elettroforesi del DNA e dell'RNA e possono risolvere frammenti di DNA che vanno da 50 paia di basi (50 bp) a 50.000 bp utilizzando tecniche elettroforetiche standard.
- I gel di poliacrilammide hanno un intervallo di separazione più limitato e sono in grado di risolvere frammenti di DNA inferiori a ~ 500 bp con una capacità di risoluzione molto elevata.
- Sia i gel di agarosio che quelli di poliacrilammide possono essere utilizzati anche nel saggio elettroforetico di spostamento della mobilità (EMSA) per caratterizzare le interazioni tra acidi nucleici e proteine.
Dopo l'elettroforesi, le molecole di DNA e RNA possono essere visualizzate tramite colorazioni o luce UV, estratte e purificate dal gel o trasferite per il blotting. Questi metodi costituiscono le comuni tecniche preliminari ad applicazioni successive come clonaggi, PCR, spettrometria di massa, sequenziamento di nuova generazione (NGS), Northern e Southern blot.
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