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17-10060

Sigma-Aldrich

ChIPAb+ NFκB p65 (RelA) - ChIP经验证的抗体和引物组

from mouse

别名:

Chip Antibody and primer set, Nuclear factor NF-kappa-B p65 subunit ChIP, Transcription factor p65 ChIP, Transcription factor p65, Nuclear factor NF-kappa-B p65 subunit, Nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells 3

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About This Item

分類程式碼代碼:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41

生物源

mouse

品質等級

無性繁殖

monoclonal

物種活性

rat, human

物種活性(以同源性預測)

mouse

製造商/商標名

ChIPAb+
Upstate®

技術

ChIP: suitable
immunoprecipitation (IP): suitable
western blot: suitable

同型

IgG3

NCBI登錄號

UniProt登錄號

運輸包裝

dry ice

相关类别

一般說明

对每批、每次的全部ChIPab+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物(通过qPCR对每个批次进行检测),以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列,使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体,以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+ NFκB p65(RelA)组包括NFκB p65(RelA)抗体,阴性对照正常小鼠IgG和qPCR引物,可扩增人IκBα启动子的299 bp区域。NFκB p65(RelA)和阴性对照以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供,可用于功能上验证NFκB p65(RelA)相关染色质的沉淀。
转录因子NFkappaB(Nuclear Factor kappa B)可参与许多重要细胞和生理过程的表达和调控,例如生长、发育、凋亡、免疫和炎症反应以及各种病毒启动子(包括人类免疫缺陷病毒长末端重复序列)的激活。NFkappaB代表一组与原癌基因c-Rel有关的结构相关且在进化上保守的蛋白质,在哺乳动物中有5个成员,包括Rel(cRel)、RelA(p65)、RelB、NFkappaB1(p50及其前体p105)和NFkappaB2 (p52及其前体p100)。NFkappaB/Rel蛋白以同二聚体或异二聚体的形式存在,以形成转录感受态或阻抑复合物。尽管大多数NFkappaB二聚体是转录激活因子,但p50/50和p52/52同二聚体可以抑制其靶基因的转录。NFkappaB的p50/p65异二聚体在细胞中含量最高。

特異性

该抗体可识别与NFkB异二聚体的p65亚基的核定位信号(NLS)重叠的表位。因此,它可选择性地与NFkB的活化形式进行结合。

免疫原

对应BSA偶联人p65的多肽。
表位:p65亚基的NLS

應用

染色质免疫沉淀:
代表性批次数据。
使用4 µg正常小鼠IgG或4 µg抗-NFκB p65(RelA)和Magna ChIP A试剂盒(目录号17-610),对由血清饥饿、TNFα处理(20 ng/mL,30分钟)的293个细胞制备的超声染色质(每个IP约3 X 10E6细胞当量)进行染色质免疫沉淀。
使用ChIP引物,IĸBα启动子作为阳性基因座,并使用β-肌动蛋白启动子引物作为阴性基因座,通过qPCR验证了NFκB p65(RelA)相关DNA片段的成功免疫沉淀(请参见图)。数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna ChIP A(目录号17-409)或EZ-ChIP(目录号17-371)协议以获取实验详细信息。


蛋白质印迹分析:
代表性批次数据。
Huvec裂解物(泳道1)、L6裂解物(泳道2)和PC12裂解物(泳道3)通过电泳分离,转移到PVDF膜上,并用抗NFκB p65(RelA)(1:500稀释度)探测。
使用与HRP偶联的山羊抗小鼠二抗和化学发光检测
系统观察蛋白质。
箭头表示蛋白NFκB p65(RelA)(约65 kDa)(请参见图)。
在L6裂解物中约230 kDa处可能看到非特异性条带。

免疫荧光:浓度为1-10 μg/mL的先前批次已被用于免疫荧光中。

免疫组织化学(石蜡切片):浓度为5-10 μg/mL(APAAP)
的先前批次已被用于免疫组化中。

免疫组织化学(冷冻切片):浓度为5-10 μg/mL(APAAP)
的先前批次已被用于免疫组化中。

电泳迁移率变动分析(EMSA):浓度为0.5-1 μg/mL的先前批次已被用于迁移分析中。

流式细胞术:前一批抗体用于流式细胞术。

最佳工作稀释度必须由最终用户确定。
研究子类别
转录因子
研究类别
表观遗传学&核功能
该ChIPAb+ NFκB p65(RelA)-ChIP验证的抗体&引物组方便地包括抗体 & 特异性对照PCR引物。

包裝

每组25次测定。推荐用于:每个染色质免疫沉淀约4 μg抗体(取决于生物学背景)。

品質

染色质免疫沉淀:
使用4 µg正常小鼠IgG或4 µg抗-NFκB p65(RelA)和Magna ChIP® A试剂盒(目录号17-610),对由血清饥饿、TNFα处理(20 ng/mL,30分钟)的293个细胞制备的超声染色质(每个IP约3 X 10E6细胞当量)进行染色质免疫沉淀。
使用ChIP引物,IĸBα启动子通过qPCR验证了NFκB p65(RelA)相关DNA片段的成功免疫沉淀(请参见图)。
有关实验详细信息,请参阅EZ-Magna ChIPA(目录号17-408)或EZ-ChIP(目录号17-371)方案。

標靶描述

~65 kDa

外觀

形式:纯化
抗-NFκB p65(RelA)(小鼠单克隆)。一个小瓶,在含有0.02 M磷酸盐缓冲液、0.25 M NaCl(pH值7.6)和0.09%叠氮化钠的缓冲液中,总体积为143 uL的100 µg蛋白A纯化的单克隆IgG3,然后添加甘油至30%。储存于-20°C。

正常小鼠IgG。一个小瓶,包含125 µg纯化小鼠IgG,溶于125 µL储存缓冲液(含0.1%叠氮化钠)中。储存于-20°C。

ChIP引物,IĸBα启动子。一个小瓶,包含75 μL 5 μM人IĸBα启动子特异性引物。储存于-20°C。
用于:GAC GAC CCC AAT TCA AAT CG
REV: TCA GGC TCG GGG AAT TTC C
纯化的蛋白 A

儲存和穩定性

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议:第一次融化后,在取下瓶盖之前,将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中,并储存于-20°C。避免反复冻融,其可能会破坏IgG并影响产品性能。注意:冷藏室温度变化至低于-20°C时可能导致含甘油的溶液在储存过程中冻结。

分析報告

对照
包括阴性对照正常小鼠IgG和对人IĸBα启动子特异性的引物。

法律資訊

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

免責聲明

除非我们的产品目录或产品附带的其他公司文档另有说明,否则我们的产品仅供研究使用,不得用于任何其他目的,包括但不限于未经授权的商业用途、体外诊断用途、离体或体内治疗用途或任何类型的消费或应用于人类或动物。

儲存類別代碼

10 - Combustible liquids


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