Molekulare Klonierung & Proteinexpression
Ziel der molekularen Klonierung ist es, ein Gen von Interesse (GOI) in einen Plasmidvektor einzubauen. Hierbei handelt es sich um ein kreisförmiges Stück DNA, das verschiedene Elemente enthält, die das Klonen, die Klonselektion und die Proteinexpression erleichtern. Häufig verwenden Forscher DNA-Restriktionsenzyme und Ligase, um das GOI unter Beibehaltung des Leserasters (in-frame) in den Expressionsvektor für die anschließende Proteinexpression einzubauen. Dieser Vektor wird anschließend in eine Zelle eingebracht, die das vom GOI kodierte Protein exprimiert, oder die Proteinexpression wird mithilfe von zellfreien Proteinsynthesesystemen erzielt.
Sobald das Protein exprimiert wird, kann die Proteinfunktion untersucht werden, da sie die Zellsignalgebung, Morphologie und andere Aspekte innerhalb der Zelle beeinflusst. Alternativ dazu kann das Protein in großen Mengen exprimiert, aufgereinigt und in zahlreichen Downstream-Anwendungen eingesetzt werden. Weiterführende Informationen finden Sie in unserem umfassenden Angebot an bewährten Reagenzien und Informationsmaterial für den gesamten Klonierungs- und Expressionsablauf für Insekten-, Bakterien- und Säuger-Proteinexpressionssysteme.
Restriktionsenzyme und DNA-modifizierende Enzyme
Bei der molekularen Klonierung verwenden Forscher häufig zwei Arten von Enzymen – Restriktionsenzyme zum Schneiden der DNA und modifizierende Enzyme, um Nukleinsäuremodifikationen vorzunehmen, häufig vor dem Ligationsschritt. Entdecken Sie unser breites Angebot an Restriktionsenzymen und anderen modifizierenden Enzymen wie alkalische Phosphatase, Protease, T7-RNA-Polymerase, Ribonuklease A und T4-DNA-Ligase für Ihren gesamten Forschungsbedarf.
Zellfreie Expressionssysteme und Expressionsvektoren mit CMV-Promotoren und FLAG®-Markierungstechnologie
Unser Klonierungs- und Expressionsportfolio macht die Gentechnik kostengünstiger und effizienter, indem es eine Sammlung vielseitiger Vektoren mit optimierten Protokollen und Klonierungskits bietet. Wählen Sie aus unserem breiten Angebot an Klonierungs- und Expressionssystemen, darunter unser zellfreies Proteinsynthese- oder Expressionssystem, wie z. B. das Next Generation Kit für zellfreie Proteinexpression (Weizenkeim) (Produkt-Nr. CFPS700) und das ALiCE® Kit (Art. Nr. AL0103000). Entdecken Sie außerdem die bakteriellen und Säuger-FLAG® Expressionsvektoren für die periplasmatische oder cytoplasmatische Expression in transienten oder stabilen Transfektionssystemen und exprimieren Sie Ihre FLAG®- oder 3X-FLAG®-Sequenz sicher am N- oder C-Terminus mit einer Enterokinase (Ek)-Schnittstelle, um das Fusions-Tag bei Bedarf zu entfernen.
Novagen® pET-System, SnapFast™ Vektoren, Simplicon™ Vektoren und UCOE™-Proteinexpressionssysteme
Alle E. coli-Expressionsvektoren und Insektenexpressionsvektoren verleihen Ampicillin-Resistenz für eine einfache Auswahl positiver Transformanten. Entdecken Sie das Novagen® pET System, den Goldstandard für die Klonierung und Expression rekombinanter Proteine in bakterieller Expression. Die von Oxford Genetics entwickelte SnapFast™ Vektorfamilie bietet ein schnelles und einfaches Protokoll, das den Transfer eines GOI von einem Vektor in einen anderen unter Verwendung der SnapFast™ Schnittstellen ermöglicht und Vektoren erzeugt, die mit Expressionssystemen von Insekten, Hefen, Bakterien und Säugern kompatibel sind. Mit unserer Ubiquitous Chromatin Opening Element (UCOE™)-Expressionsvektortechnologie kann in stabil transfizierten Säugerzellen in weniger als 30 Tagen Protein im Grammbereich produziert werden. Die UCOE™-Expressionstechnologie verhindert die Stummschaltung von Transgenen und ermöglicht eine konsistente, stabile und hochwertige Genexpression, die bis zu 20-mal höher ist als bei herkömmlichen Vektoren, unabhängig von der chromosomalen Integrationsstelle. Das Simplicon™ In-vivo-Proteinexpressionssystem ist ein nicht genomintegrierendes, abstimmbares und synthetisches, selbstreplizierendes RNA-basiertes Expressionssystem, mit dem eine sofortige, hoch nachhaltige Proteinexpression mehrerer Gene in transfizierte menschliche Zellen ohne das Risiko der Genomintegration erzeugt wird. Weitere Informationen finden Sie in unserem Video Simplicon™ technology utilized for efficient human iPSCs generation.
Reagenzien und Ressourcen für die Transformation von Bakterien und Hefen
Bei der Bakterientransformation wird fremde DNA mit Methoden wie Hitzeschock und Elektroporation in Bakterien eingebracht. Unser Portfolio an kompetenten Zellen wurde für eine optimale Proteinexpression sogar für die anspruchsvollsten rekombinanten Proteine entwickelt. In unserem Leitfaden zur Auswahl kompetenter Zellen Competent Cell Selection Guide finden Sie eine Vielzahl neuer kompetenter bakterieller Zellen für eine breite Palette von Anwendungen, darunter Proteinexpression, routinemäßiges oder schwieriges Klonen und Bibliothekerstellung. Darüber hinaus hat die rekombinante Proteinexpression in Saccharomyces cerevisiae viele Vorteile, wie z. B. einfache Protokolle, die Verwendung von Basisreagenzien und Skalierbarkeit. Entdecken Sie die vielen Produkte, die für die Hefetransformation als Teil des Ablaufs der Proteinexpression zur Verfügung stehen. Unsere NovaBlue® kompetenten Zellen, die für Transfektionseffizienz und Plasmidkonservierung optimiert sind, unterstützen hervorragende Bibliothekenvorbereitungen und Plasmidstabilität. Darüber hinaus sind die kompetenten Zellen von Novagen® so konzipiert, dass sie eine korrekte Proteinfaltung, eine erhöhte Löslichkeit oder die Expression zytotoxischer Proteine erleichtern. Die beliebtesten Marken sind die Systeme Rosetta™, Origami™ und Overnight Express™.
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