T1005

Trypsin aus Rinderpankreas

Type XI, lyophilized powder, ≥6,000 BAEE units/mg protein

• Synonym(e): Serine Protease 1
• CAS-Nummer: 9002-07-7
• EC-Nummer: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-650-8
• MDL-Nummer: MFCD00082094
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.78

Eigenschaften

• Biologische Quelle: bovine pancreas
• Typ: Type XI
• Form: lyophilized powder
• Spezifische Aktivität: ≥6,000 BAEE units/mg protein
• Mol-Gew.: 23.8 kDa
• Zusammensetzung: protein, 90-100%
• Verunreinigungen: salt, essentially free
• Löslichkeit: hydrochloric acid: soluble 1 mM, clear
• Fremdaktivität: Chymotrypsin ≤0.1 BTEE units/mg protein
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Anwendung

Für den Trypsinverdau von Peptiden ein Verhältnis von ca. 1:100 bis 1:20 (Trypsin:Peptid) verwenden. Die typische Verwendung für dieses Produkt besteht im Entfernen von adhärenten Zellen von einer Kulturoberfläche. Die zum Ablösen von Zellen von ihrem Substrat erforderliche Trypsinkonzentration hängt in erster Linie vom Zelltyp und dem Alter der Kultur ab. Trypsine werden auch für die Resuspendierung von Zellen während der Zellkultur, in der Proteomikforschung für den Verdau von Proteinen und in verschiedenen In-Gel-Verdaus verwendet. Weitere Anwendungsbereiche sind u. a. die Beurteilung der Kristallisierung mit membranbasierten Methoden und eine Studie zur Feststellung, ob Proteinfaltungsraten und Proteinausbeuten durch das Vorhandensein von sog. „kinetischen Fallen“ begrenzt werden können.

Trypsin aus Schweinepankreas wurde verwendet:-

• Für die Trypsinisierung zur Eliminierung des membrangebundenen Alloantigens.
• Für die Inkubation der 20-kD-Amylase-bindenden Komponente zur Beurteilung der chemischen Eigenschaften.
• Für die Herstellung von Laktoferrin abbauenden Produkten zur Beurteilung der antiadipogenen Aktivität.

Biochem./physiol. Wirkung

Trypsin spaltet Peptide auf der C-terminalen Seite von Lysin- und Argininrückständen. Die Hydrolyse dieser Reaktion wird verlangsamt, wenn sich auf einer der Seiten der Spaltstelle ein Säurerest befindet, und die Hydrolyse wird beendet, wenn sich auf der Carboxylseite der Spaltstelle ein Prolinrest befindet. Der optimale pH-Wert für die Trypsinaktivität liegt zwischen 7 und 9. Trypsin kann auch zum Spalten von Ester und Amidbindungen von synthetischen Derivaten von Aminosäuren eingesetzt werden. EDTA wird Trypsinlösungen als Chelatbildner zugegeben, der Calcium- und Magnesiumionen neutralisiert, welche die Peptidbindungen verdecken, auf die sich das Trypsin auswirkt. Durch das Entfernen dieser Ionen wird die enzymatische Aktivität verstärkt.

Serinprotease-Inhibitoren, u. a. DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF und Aprotinin, hemmen Trypsin.

Komponenten

Trypsin besteht aus einem einkettigen Polypeptid von 223 Aminosäureresten, das durch Entfernen eines N-terminalen Hexapeptids aus an der Lys-lle-Peptidbindung gespaltem Trypsinogen entsteht. Die Sequenz der Aminosäuren wird durch 6 Sulfidbrücken vernetzt. Dieses ist die native Form von Trypsin (Beta-Trypsin). BETA-Trypsin kann autolysiert und am Lys-Ser-Rest gespalten werden, um Alpha-Trypsin zu erzeugen. Trypsin gehört zur Familie der Serinproteasen.

Vorsicht

Lösungen in 1 mM HCl können in Aliquoten eingefroren werden und sind bei -20°C für 1 Jahr haltbar. In Gegenwart von Ca²⁺ vermindert sich auch die Autolyse von Trypsin, sodass dieses in der Lösung erhalten bleibt. Trypsin behält auch den Großteil seiner Aktivität in 2,0 M Harnstoff, 2,0 M Guanidin-HCl oder 0,1 % (w/v) SDS.

Einheitendefinition

Eine BAEE-Einheit erzeugt unter Verwendung von BAEE als Substrat ein A₂₅₃ von 0,001 pro Minute bei einem pH-Wert von 7,6 und einer Temperatur von 25 °C.

Angaben zur Herstellung

Dieses Produkt wird von Pankreas aus Neuseeland gewonnen. Es ist wasserlöslich in 1 mM HCl bei 1 mg/ml.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08,GHS07
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H315,H319,H334,H335
• P-Sätze: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Gefahreneinstufungen: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Zielorgane: Respiratory system
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Persönliche Schutzausrüstung: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves