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DIG DNA-Markierungsmischung

• Synonym(e): DNA-Markierung
• UNSPSC-Code: 41105500

Eigenschaften

• Form: solution
• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 25 standard reactions
• Verpackung: pkg of 50 μL
• Hersteller/Markenname: Roche
• Grünere Alternativprodukt-Eigenschaften: Designing Safer Chemicals; Learn more about the Principles of Green Chemistry.
• sustainability: Greener Alternative Product
• Farbe: colorless
• Löslichkeit: water: miscible
• Grünere Alternativprodukt-Kategorie: Aligned,
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die DIG DNA-Markierungsmischung ist eine anwenderfreundliche Markierungsmischung für die schnelle Markierung durch Random Priming mit Digoxigenin (DIG)-11-Desoxyuridin-Triphosphat (dUTP). DIG-dUTP wird in alle 20 bis 25 Nukleotide der neu synthetisierten DNA integriert. Aufgrund dieser Haptendichte in der DNA wird die höchstmögliche Sensitivität in der Nachweisreaktion erzielt.
Wir verpflichten uns, Ihnen umweltfreundlichere Alternativprodukte anzubieten, die einen oder mehrere der „12 Grundsätze der Grünen Chemie“ erfüllen. Dieses Produkt wurde als sicherere Chemikalie entwickelt. Das DIG-System wurde als empfindliche und kosteneffektive Alternative zur radioaktiven Markierung im Nachweis von Nukleinsäuren entwickelt. Die Vielseitigkeit des DIG-Systems ist in zahlreichen Publikationen belegt. Die radioaktive Markierung stellt daher nicht mehr die einzige Option für die DNA-Markierung zur Hybridisierung dar.

Anwendung

Die DIG DNA-Markierungsmischung wird in vielen verschiedenen Hybridisierungsmethoden eingesetzt, darunter:

• Southern Blots
• Northern Blots
• Dot Blots
• Sreening von Genbibliotheken
• In-situ-Hybridisierung

Leistungsmerkmale und Vorteile

Inhalt
10x konzentriertes dNTP-Markierungsgemisch: 1 mM dATP, 1 mM dCTP, 1 mM dGTP, 0,65 mM dTTP, 0,35 mM DIG-dUTP, alkaliresistent, pH 7,5 (+20 °C)

Testzeit: Markierung: 1 Stunde bis über Nacht
Markierungseffizienz: Mit 1μg DNA pro Assay können etwa 10 % der Nukleotide in ca. 250 μg der neu synthetisierten markierten DNA innerhalb von 1 Stunde und etwa 30 % der Nukleotide in ca. 750 μg nach 20 Stunden integriert werden.

Qualität

Funktionsgetestet im DIG DNA-Markierungskit und im DIG-Detektionskit für Nukleinsäure.

Prinzip

DIG-markierte DNA-Sonden werden gemäß der random-primed Markierungsmethode erzeugt, die auf der Hybridisierung von Random-Oligonukleotiden am denaturierten DNA-Template basiert. Der komplementäre DNA-Strang wird zur Verlängerung mittels Klenow-Fragment (Enzym) unter Verwendung von 3′-OH-Termini zufälliger Random-Oligonukleotiden als Primer und einer Mischung aus Desoxyribonukleotiden mit alkaliresistentem DIG-11-dUTP synthetisiert. DIG-dUTP wird in alle 20 bis 25 Nukleotide der neu synthetisierten DNA integriert. Aufgrund dieser Haptendichte in der DNA wird eine höchstmögliche Sensitivität in der Nachweisreaktion erzielt.

Angaben zur Herstellung

Probenmaterialien
Als Template für Markierungsreaktionen

• DNA-Fragmente von mindestens 100 bp
• Linearisierte Plasmide, Cosmid oder λDNA,
• Superspiralisierte DNA
• Oder minimale DNA-Mengen (10 μg); es können z. B. aus Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt isolierte DNA-Restriktionsfragmente verwendet werden.

Hinweis: Die Markierung von linearer DNA ist effizienter als die Markierung von ringförmiger oder superspiralisierter DNA.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: nwg
• Flammpunkt (°F): No data available
• Flammpunkt (°C): No data available