11277073910
Roche
DIG RNA-Markierungsmix
sufficient for 20 reactions, solution
Synonym(e):
Nukleinsäuremarkierung
Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise
Alle Fotos(2)
About This Item
UNSPSC-Code:
41105500
Empfohlene Produkte
Form
solution
Qualitätsniveau
Verwendung
sufficient for 20 reactions
Verpackung
pkg of 40 μL
Hersteller/Markenname
Roche
Verunreinigungen
Ribonuclease, none detected (up to 20 µl using MSII-RNA)
Farbe
colorless
Löslichkeit
water: miscible
Lagertemp.
−20°C
Allgemeine Beschreibung
Markierungseffizienz: Etwa 10μg digoxigeninmarkierte RNA voller Länge wird aus 1μg linearer Template-DNA transkribiert.
Testzeit: 135 Minuten
Probenmaterialien
Linearisierte Plasmid-DNA:
Die zu transkribierende DNA wird in die Polylinkerstelle eines geeigneten Transkriptionsvektors kloniert, der neben dem Polylinker einen Promoter für SP6, T7 oder T3 RNA-Polymerase enthält. Für die Synthese von „Run-off-Transkripten“ wird das Plasmid durch ein Restriktionsenzym linearisiert. Es sollten Restriktionsenzyme verwendet werden, die 5′-Überhänge erzeugen; 3′-Überhänge sollten vermieden werden. Die linearisierte Template-DNA sollte durch Phenolchloroform-Extraktion und Ethanol-Ausfällung aufgereinigt werden, um eine RNase-Kontamination zu vermeiden. Für ′Run-around′-Transkription wird zirkuläre Plasmid-DNA verwendet.
PCR-Produkt:
PCR-Fragmente, die RNA-Polymerase-Promotersequenzen enthalten, können ebenfalls als Templates für die Transkription verwendet werden. Die Aufreinigung des PCR-Fragments mithilfe einer HighPure-Säule vor der Transkription wird empfohlen.
Testzeit: 135 Minuten
Probenmaterialien
Linearisierte Plasmid-DNA:
Die zu transkribierende DNA wird in die Polylinkerstelle eines geeigneten Transkriptionsvektors kloniert, der neben dem Polylinker einen Promoter für SP6, T7 oder T3 RNA-Polymerase enthält. Für die Synthese von „Run-off-Transkripten“ wird das Plasmid durch ein Restriktionsenzym linearisiert. Es sollten Restriktionsenzyme verwendet werden, die 5′-Überhänge erzeugen; 3′-Überhänge sollten vermieden werden. Die linearisierte Template-DNA sollte durch Phenolchloroform-Extraktion und Ethanol-Ausfällung aufgereinigt werden, um eine RNase-Kontamination zu vermeiden. Für ′Run-around′-Transkription wird zirkuläre Plasmid-DNA verwendet.
PCR-Produkt:
PCR-Fragmente, die RNA-Polymerase-Promotersequenzen enthalten, können ebenfalls als Templates für die Transkription verwendet werden. Die Aufreinigung des PCR-Fragments mithilfe einer HighPure-Säule vor der Transkription wird empfohlen.
DIG-markierte, einzelsträngige RNA-Sonden definierter Länge werden durch In-vitro-Transkription erzeugt. Unter Standardbedingungen wird DIG-11-UTP durch SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen bei etwa jedem 20. bis 25. Nukleotid des Transkripts eingebaut. Der DIG RNA-Markierungsmix wurde spezifisch zur Verwendung mit SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen entwickelt, die mit einem optimierten Transkriptionspuffer geliefert werden.
Praktische Nukleotidmischung zur Markierung von RNA mit Digoxigenin-11-UTP.
Inhalt
10x-Lösung mit: 10 mM ATP, CTP, GTP (jeweils), 6,5 mM UTP, 3,5 mM DIG-11-UTP.
Praktische Nukleotidmischung zur Markierung von RNA mit Digoxigenin-11-UTP.
Inhalt
10x-Lösung mit: 10 mM ATP, CTP, GTP (jeweils), 6,5 mM UTP, 3,5 mM DIG-11-UTP.
Spezifität
Hitzeinaktivierung: Die Reaktion wird durch Zugabe von 2 μl 0,2 M EDTA (pH 8,0) gestoppt.
Anwendung
RNA-Markierung mit Digoxigenin-11-UTP durch In-vitro-Transkription mit SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen. DIG-markierte RNA werden in verschiedenen Hybridisierungsmethoden eingesetzt:
- Northern Blots
- Northern Blots
- Dotblots
- Plaque- oder Kolonie-Lifts
- RNase-Schutzversuche
- Chromosomen, Zellen und Gewebeschnitte in situ
Leistungsmerkmale und Vorteile
Der DIG RNA-Markierungsmix wurde spezifisch zur Verwendung mit SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen von Roche entwickelt, die mit einem optimierten Transkriptionspuffer geliefert werden.
Qualität
Funktionsgetestet im DIG RNA-Markierungskit und im DIG Nukleinsäure-Detektionskit.
Sonstige Hinweise
Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.
Signalwort
Warning
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Acute Tox. 4 Oral
Lagerklassenschlüssel
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
Flammpunkt (°F)
does not flash
Flammpunkt (°C)
does not flash
Analysenzertifikate (COA)
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Determine the labeling efficiency in terms of μg (expected yield of a standard labeling reaction is 20 μg of DIG labeled RNA per μg linearized template DNA after the DIG RNA labeling reaction).
Unser Team von Wissenschaftlern verfügt über Erfahrung in allen Forschungsbereichen einschließlich Life Science, Materialwissenschaften, chemischer Synthese, Chromatographie, Analytik und vielen mehr..
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