17-10394
Rac1/Cdc42-Aktivierungs-Pulldown-Assay mit magnetischen Beads
The Rac1/cdc42 Activation Magnetic Beads Pulldown Assay provides an effective method for detecting Rac & Cdc42 activity in cell lysates with higher yield & easier process utilizing magenetic bead properties.
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About This Item
UNSPSC-Code:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.32
Empfohlene Produkte
Qualitätsniveau
Speziesreaktivität
human, rat, mouse
Hersteller/Markenname
Upstate®
Methode(n)
activity assay: suitable
affinity binding assay: suitable (G-protein)
NCBI-Hinterlegungsnummer
UniProt-Hinterlegungsnummer
Versandbedingung
dry ice
Angaben zum Gen
human ... RAC1(5879)
Allgemeine Beschreibung
Der Rac1/Cdc42-Aktivierungs-Pulldown-Assay mit magnetischen Beads (Katalognr. 17-10394) stellt ein wirksames Verfahren für den Nachweis der Rac- und Cdc42-Aktivität in Zelllysaten dar. Dieser Assay nutzt den Downstream-Effektor von Rac/Cdc42, p21-aktivierte Proteinkinase (PAK1), um die aktive GTP-gebundene Form von Rac/Cdc42 aus der Probe zu isolieren. Die p21-Bindungsdomäne (PBD) von PAK1 wird als GST-Fusionsprotein exprimiert und ist an magnetische Beads gekoppelt. Nach der Trennung auf einem Magnetständer wird ein Immunblot durchgeführt und das aktivierte Rac/Cdc42 wird mit spezifischen monoklonalen Antikörpern, gefolgt von einem an HRP konjugierten Sekundärantikörper und ECL-Reagens nachgewiesen.
Spezifität
Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch und Maus. Eine Kreuzreaktion mit allen Säugetierspezies wird erwartet.
Anti-Rac1, Klon 23A8: Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch, Maus und Ratte. Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht bekannt.
Anti-Cdc42Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch, Maus, Ratte und Hund. Eine Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht bekannt.
Anti-Rac1, Klon 23A8: Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch, Maus und Ratte. Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht bekannt.
Anti-Cdc42Artenübergreifende Kreuzreaktivität: Mensch, Maus, Ratte und Hund. Eine Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht bekannt.
Anwendung
Forschungskategorie
Zellsignalisierung
Signalisierung
Zellsignalisierung
Signalisierung
Komponenten
Rac1/Cdc42-Assay-Reagens (Pak-1PBD, magnetische Beads): 300 μg Pak-1 PBD in 150 μl magnetischen Glutathion-Beads, als 50 % Beads in Aufschlämmung in PBS mit 50 % Glycerin für ein Endvolumen von 300 μl bereitgestellt.
Anti-Rac1, Klon 23A8: Ein Fläschchen mit 250 μg aufgereinigtem IgG2akappa in 250 μl Lagerpuffer (0,1 mol/l Tris-Glycin, pH-Wert 7,4, 0,15 mol/l NaCl mit 0,05 % Natriumazid).
Anti-Cdc42, monoklonales Maus-IgG1: Ein Fläschchen mit 50 μg aufgereinigtem Maus-IgG1 in 200 μl 10-mol/l-Natriumphosphat, pH-Wert 7,5, 75 mmol/l NaCl, 0,75 mmol/l Natriumazid, 0,5 mg/ml BSA und 50 % Glycerin.
Mg2+-Lyse-/Waschpuffer, 5X, Katalognr. 20-168: Zwei Fläschchen mit je 18 ml 5X-MLB: 125 mmol/l HEPES, pH-Wert 7,5, 750 mmol/l NaCl, 5 % Igepal Ca-630, 50 mmol/l MgCl2, 5 mmol/l EDTA und 10 % Glycerin.
100X GTPγS, 10 mmol/l, Katalognr. 20-176: Ein Fläschchen mit 50 μl 10-mmol/l-GTPγS, 100X-Stammlösung in 50 mmol/l Tris-HCl, pH-Wert 7,8, nicht hydrolysierbares Analogon von GTP. Ausreichend zum Markieren von 5 ml Zelllysaten.
100X GDP, 100 mmol/l, Katalognr. 20-177: Ein Fläschchen mit 50 μl 100-mmol/l-GDP, 100X-Stammlösung in 50 mmol/l Tris-HCl, pH-Wert 7,8. GDP (Guanosin-5′-Diphosphat) für die In-vitro-Markierung von G-Proteinen in der inaktiven Form. Ausreichend zum Markieren von 5 ml Zelllysaten.
Anti-Rac1, Klon 23A8: Ein Fläschchen mit 250 μg aufgereinigtem IgG2akappa in 250 μl Lagerpuffer (0,1 mol/l Tris-Glycin, pH-Wert 7,4, 0,15 mol/l NaCl mit 0,05 % Natriumazid).
Anti-Cdc42, monoklonales Maus-IgG1: Ein Fläschchen mit 50 μg aufgereinigtem Maus-IgG1 in 200 μl 10-mol/l-Natriumphosphat, pH-Wert 7,5, 75 mmol/l NaCl, 0,75 mmol/l Natriumazid, 0,5 mg/ml BSA und 50 % Glycerin.
Mg2+-Lyse-/Waschpuffer, 5X, Katalognr. 20-168: Zwei Fläschchen mit je 18 ml 5X-MLB: 125 mmol/l HEPES, pH-Wert 7,5, 750 mmol/l NaCl, 5 % Igepal Ca-630, 50 mmol/l MgCl2, 5 mmol/l EDTA und 10 % Glycerin.
100X GTPγS, 10 mmol/l, Katalognr. 20-176: Ein Fläschchen mit 50 μl 10-mmol/l-GTPγS, 100X-Stammlösung in 50 mmol/l Tris-HCl, pH-Wert 7,8, nicht hydrolysierbares Analogon von GTP. Ausreichend zum Markieren von 5 ml Zelllysaten.
100X GDP, 100 mmol/l, Katalognr. 20-177: Ein Fläschchen mit 50 μl 100-mmol/l-GDP, 100X-Stammlösung in 50 mmol/l Tris-HCl, pH-Wert 7,8. GDP (Guanosin-5′-Diphosphat) für die In-vitro-Markierung von G-Proteinen in der inaktiven Form. Ausreichend zum Markieren von 5 ml Zelllysaten.
Qualität
Regelmäßig mittels Präzipitation von Rac1-GTP und Cdc42-GTP aus 3T3/A31- und HeLa-Zelllysaten, die mit GTPγS beladen wurden (Lysate wurden für Cdc42-GTP in vitro mit GTPγS beladen), beurteilt. Das ausgefällte Rac1-GTP und Cdc42-GTP wurde mittels Immunblot-Analyse unter Verwendung von Anti-Rac1 (1 μg/ml) nachgewiesen.
Lagerung und Haltbarkeit
Bei -20 °C ab Versanddatum 1 Jahr haltbar
Rechtliche Hinweise
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Haftungsausschluss
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Signalwort
Danger
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Aquatic Acute 1 - Aquatic Chronic 2 - Eye Dam. 1
Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
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