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Kit Transcriptor One-Step RT-PCR

sufficient for 50 reactions, sufficient for 150 reactions, suitable for RT-qPCR, suitable for RT-PCR, hotstart

• Codice UNSPSC: 41106313
• NACRES: NA.55

Proprietà

• impiego: sufficient for 150 reactions; sufficient for 50 reactions
• Livello qualitativo: 100
• Caratteristiche: hotstart
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• Confezionamento: pkg of 150 reactions (04655885001); pkg of 50 reactions (04655877001)
• tecniche: RT-PCR: suitable; RT-qPCR: suitable
• input: purified RNA
• Metodo di rivelazione: probe-based

Descrizione

Descrizione generale

La RT-PCR a fase unica è una tecnica molto sensibile per determinare la presenza o l′assenza di stampi di RNA, o per quantificare i livelli di espressione attraverso l′analisi qualitativa, semi-quantitativa o quantitativa dei livelli di trascrizione dell′RNA (per es. per la quantificazione del livello del virus). Questo metodo RT-PCR facilita anche l′amplificazione di messaggi rari per la clonazione. Il formato a fase unica è comodo, mostra una ridotta variabilità da una reazione all′altra e previene la contaminazione riducendo al minimo le fasi con manipolazione.
Il kit Transcriptor One-Step RT-PCR offre i benefici eccezionali della trascrittasi inversa Transcriptor, insieme ai vantaggi di una RT-PCR a fase unica con avviamento a caldo.

Per la RT-PCR a fase unica con avviamento a caldo, utilizzando la miscela enzimatica di trascrittasi inversa Transcriptor, l′inibitore della Rnasi Protector e il sistema Expand, con un innovativo tampone per avviamento a caldo (brevetti in corso di registrazione).

The Kit Transcriptor One-Step RT-PCR fornisce tutti i componenti necessari per la RT-PCR a fase unica (fatta eccezione per primer e stampo) in un comodo formato. La confezione da 50 reazioni include anche 10 reazioni di controllo (RNA di controllo e miscela di primer di controllo).
La miscela di enzimi per RT-PCR del kit contiene quattro differenti enzimi:′ La trascrittasi inversa Transcriptor garantisce una trascrizione inversa sensibile e solida a resa elevata; l′inibitore dell′RNasi Protector, totalmente attivo a temperature elevate, fornisce la massima protezione dello stampo durante la trascrizione inversa; il sistema Expand, una miscela di Taq DNA polimerasi e polimerasi correttiva, riduce al minimo la possibilità di mutazioni, offrendo resa elevata e fedeltà della PCR.
Il tampone di reazione per RT-PCR ottimizzato include dNTP di alta qualità e fornisce le prestazioni globalmente migliorate di un sistema con avviamento a caldo. Il componente esclusivo del tampone per avviamento a caldo′ lega e sequestra i primer a temperature inferiori per impedire che i primer si leghino a siti non specifici. Un altro componente lega il magnesio, in modalità dipendente dalla temperatura, per evitare la sintesi non controllata del DNA. Questa nuova formulazione del tampone è efficace durante la trascrizione inversa come nella PCR, aumentando la sensibilità e la specificità.
La combinazione di tampone di reazione ottimizzato e miscela di enzimi assicura l′efficienza della trascrizione di stampi difficili con struttura secondaria e contenuto in GC elevati senza aumentare la temperatura di reazione.

Applicazioni

Il kit Transcriptor One-Step RT-PCR è stato progettato per l′analisi dell′RNA (RNA totale, mRNA, RNA trascritto in vitro o RNA virale) con RT-PCR endpoint rapida, sensibile e specifica utilizzando primer gene-specifici.
Grazie a un innovativo tampone di reazione, il kit unisce una trascrittasi inversa sensibile, ad alto rendimento con il miglioramento delle prestazioni di un sistema con avviamento a caldo per un′amplificazione a elevata fedeltà e alto rendimento di una serie di stampi, incluso l′RNA con un alto contenuto di GC.
Il kit offre un metodo RT-PCR comodo, molto sensibile, a fase unica per generare trascritti fino a 6,5 kb per applicazioni quali:

• Analisi qualitativa, semi-quantitativa o quantitativa dei livelli di trascrizione dell′RNA
• Determinazione della presenza o dell′assenza di stampi di RNA
• Quantificazione dell′espressione genica attraverso l′analisi dell′RNA (per es. per la quantificazione del livello del virus)
• Clonazione di RNA fino a 6,5 kb

Il formato a fase unica è comodo, riduce la variabilità da una reazione all′altra e previene la contaminazione riducendo al minimo le fasi con manipolazione.

Il kit Transcriptor One-Step RT-PCR è stato usato nell′amplificazione:

• di frammenti del virus dell′epatite C (HCV)
• della regione CH3 della catena pesante e della regione polyA della catena leggera
• del virus della leucemia murina (MLV)

Caratteristiche e vantaggi

• Sensibilità e resa elevate in un′ampia gamma di amplificazioni:

Rilevazione anche di 1 solo fg di RNA totale.

• Specificità elevata e riduzione di primer-dimeri

Prestazioni eccellenti con il tampone proprietario per avviamento a caldo del kit (brevetti in corso di registrazione).

• Produce frammenti lunghi:

Genera trascritti fino a 6,5 kb.

• Trascrive una serie di stampi, anche i più difficili (per es. RNA con alto contenuto di GC):

Risolve la struttura secondaria elevata grazie alla trascrittasi inversa termostabile Transcriptor associata a un tampone ottimizzato.

• Risultati migliori in minor tempo con un comodo kit:

Ridurre al minimo le fasi di pipettaggio e impedire la contaminazione usando una miscela enzimatica premiscelata e un tampone ottimizzato che include dNTP per PCR e componenti per l′avviamento a caldo.

• Proteggere il campione di RNA:

Protegge l′RNA dalla degradazione da parte delle RNasi con l′inibitore delle RNasi termostabile Protector che viene fornito e che agisce durante la RT-PCR a fase unica quando gli altri inibitori delle RNasi falliscono.

• Più fiducia nei propri risultati:

Monitoraggio delle prestazioni con le reazioni di controllo fornite.

Componenti

• Miscela di enzimi per RT-PCR che contiene la trascrittasi inversa Transcriptor, l′inibitore della RNasi Protector e il sistema Expand
• Il tampone di reazione per RT-PCR che contiene componenti che mediano l′avviamento a caldo e dNTP a una concentrazione 5x
• Acqua (grado PCR)
• RNA di controllo: HAV RNA, trascritto in vitro *
• Miscela di primer di controllo HAV RNA (primer diretto e inverso) *

* Inclusi solo nella confezione da 50 reazioni.

Qualità

La funzione di ogni lotto di kit Transcriptor One-Step RT-PCR è analizzata in RT-PCR. La RT-PCR si esegue con 1.000 copie di HAV RNA, trascritto in vitro (fornito con n. cat. 04 655 877 001). L′impostazione della reazione di controllo e la successiva RT-PCR con primer per un frammento di HAV RNA da 246 bp si eseguono con il protocollo RT-PCR standard (trascrizione inversa a +50 °C per 30 minuti) fornito nel foglietto illustrativo. Con 1.000 copie del target, dopo elettroforesi su gel di agarosio e colorazione con bromuro di etidio si ottiene una banda ben visibile.
Inoltre, si esegue la RT-PCR su una serie di diluizioni di RNA totale di fegato umano (10 ng, 1 ng e 0,1 ng). La RT-PCR con primer specifici per un frammento di ApoB da 2,5 kb si esegue con il protocollo RT-PCR standard (trascrizione inversa a +50 °C per 30 minuti) fornito nel foglietto illustrativo. Con 1 ng di RNA, dopo elettroforesi su gel di agarosio e colorazione con bromuro di etidio si ottiene una banda ben visibile.

Altre note

Descrizione generale delle trascrittasi inverse

Da utilizzare solo per ricerca nelle scienze naturali. Non usare in procedure diagnostiche.

Informazioni sulla sicurezza

• Indicazioni di pericolo: H412
• Consigli di prudenza: P273 - P501
• Classi di pericolo: Aquatic Chronic 3
• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 2
• Punto d’infiammabilità (°F): does not flash
• Punto d’infiammabilità (°C): does not flash