CELLPRO-RO
Roche
Reagente WST-1 di proliferazione cellulare
suitable for protein quantification, suitable for cell analysis, detection, solution
Sinonimo/i:
reagente di proliferazione cellulare, wst-1
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About This Item
Codice UNSPSC:
12352200
NACRES:
NA.21
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Forma fisica
solution
Livello qualitativo
impiego
sufficient for ≤2,500 tests (11644807001)
sufficient for ≤800 tests (05015944001)
Confezionamento
bottle of 25 mL (11644807001)
bottle of 8 mL (05015944001)
Produttore/marchio commerciale
Roche
Condizioni di stoccaggio
protect from light
tecniche
protein quantification: suitable
pH ottimale
8.0(for physiological conditions our product is buffered pH 7.3)
λmax
440-480 nm
applicazioni
cell analysis
detection
Metodo di rivelazione
colorimetric
Temperatura di conservazione
−20°C
Descrizione generale
Contenuto
Soluzione pronta all′uso contenente WST-1 e un reagente elettrofilo.
Soluzione pronta all′uso contenente WST-1 e un reagente elettrofilo.
Determinazione colorimetrica (basata su WST-1) per la quantificazione non radioattiva della proliferazione delle cellule, della vitalità cellulare e della citotossicità.
La proliferazione cellulare richiede la replicazione del DNA genomico. Perciò, il monitoraggio della sintesi del DNA oltre ad essere utile negli studi sulla regolazione di questo importante processo biologico, è un parametro indiretto della proliferazione cellulare. La [3H]-timidina è tradizionalmente usata per marcare il DNA di cellule in replicazione. Per ovviare agli svantaggi connessi con l′uso della [3H]-timidina sono stati sviluppati metodi alternativi non radioattivi basati sulla 5-bromo-2′-deossiuridina (BrdU). L′uso della chemiluminescenza aumenta la sensibilità e allarga l′intervallo di misura.
Applicazioni
Il reagente di proliferazione WST-1 è usato per la quantificazione spettrofotometrica non-radioattiva della prolificazione cellulare e la vitalità in popolazioni cellulari usando il formato piastra a 96 pozzetti. Misura della proliferazione cellulare in risposta a fattori di crescita, citochine, mitogeni e nutrienti.
- Analisi di composti citotossici e citostatici come i farmaci contro il cancro e altri composti farmaceutici.
- Rilevazione di anticorpi inibitori di crescita e mediatori fisiologici.
Caratteristiche e vantaggi
- Comodo: approfitta di un reagente pronto all′uso.
- Facile e sicuro: evita isotopi radioattivi, stadi di lavaggio e reagenti aggiuntivi.
- Accurato: Le misure di assorbanza sono strettamente correlate al numero delle cellule.
- Sensibile: rileva anche un basso numero di cellule.
- Veloce: processa un alto numero di campioni usando un lettore ELISA multi-pozzetto.
Principio
Il sale di tetrazolio stabile WST-1 viene scisso producendo formazano solubile attraverso un complesso meccanismo cellulare che ha luogo primariamente sulla superficie delle cellule. Questa bioriduzione dipende essenzialmente dalla produzione di NAD(P)H nelle cellule vitali durante la glicolisi. Pertanto, la quantità di formazano prodotta è direttamente correlata al numero di cellule metabolicamente attive della coltura.
Le cellule cresciute in una piastra di coltura a 96 pozzetti vengono incubate col reagente WST-1 per 0,5 - 4 ore. Dopo questo tempo di incubazione, si quantifica il formazano prodotto con uno spettrofotometro a scansione per piastre multipozzetto (lettore ELISA). L′assorbanza misurata è direttamente proporzionale al numero di cellule vitali.
I saggi per la determinazione della proliferazione e della vitalità cellulare sono particolarmente importanti per le applicazioni di routine della biologia cellulare. I sali di tetrazolio (es, MTT, XTT, WST-1) sono particolarmente utili per questo tipo di analisi. I sali di tetrazolio vengono scissi con generazione di formazano dal sistema di reduttasi succinato-tetrazolio (EC 1.3.99.1) che fa parte della catena respiratoria dei mitocondri ed è attivo soltanto in cellule con metabolismo intatto.
Le cellule cresciute in una piastra di coltura a 96 pozzetti vengono incubate col reagente WST-1 per 0,5 - 4 ore. Dopo questo tempo di incubazione, si quantifica il formazano prodotto con uno spettrofotometro a scansione per piastre multipozzetto (lettore ELISA). L′assorbanza misurata è direttamente proporzionale al numero di cellule vitali.
I saggi per la determinazione della proliferazione e della vitalità cellulare sono particolarmente importanti per le applicazioni di routine della biologia cellulare. I sali di tetrazolio (es, MTT, XTT, WST-1) sono particolarmente utili per questo tipo di analisi. I sali di tetrazolio vengono scissi con generazione di formazano dal sistema di reduttasi succinato-tetrazolio (EC 1.3.99.1) che fa parte della catena respiratoria dei mitocondri ed è attivo soltanto in cellule con metabolismo intatto.
Nota sulla preparazione
Concentrazione di lavoro: Per ottenere i migliori risultati, aggiungere 10 μL di reagente WST-1 per pozzetto di proliferazione cellulare alle cellule già coltivate in 100 μL per pozzetto (diluizione finale 1:10).
Usando il volume 100 μL per pozzetto di coltura cellulare, un flaconcino basterà per portare avanti 2500 prove (25 micropiastre).
Notare: Se le cellule sono coltivate in 200 μL per pozzetto , aggiungere 20 μL per pozzetto di Reagente di proliferazione WST-1.
Condizioni di stoccaggio (soluzione di lavoro): Da 2 a 8 °C
Nota: Quando dopo lo scongelamento si osservassero precipitati o torbidità scaldare la soluzione a 37 °C per 2-10 minuti agitando per sciogliere i precipitati. Si sconsiglia la centrifugazione perché la concentrazione attiva diminuisce. Dopo essere stato sciolto il reagente WST-1 può essere usato senza limitazioni. Si prega di stoccare in questo modo:
Una volta scongelato conservare per quattro settimane a temperature da 2 a 8 °C, al riparo dalla luce. Tuttavia va notato che la soluzione potrebbe diventare viscosa. Nel caso, scaldare la soluzione a 37 °C per 2-10 minuti come sopracitato.
Stoccaggio a lungo termine
Per stoccare a lungo, aliquote di WST-1 si possono conservare in provette di plastica a temperature da -15 a -25 °C fino alla data di scadenza.
Usando il volume 100 μL per pozzetto di coltura cellulare, un flaconcino basterà per portare avanti 2500 prove (25 micropiastre).
Notare: Se le cellule sono coltivate in 200 μL per pozzetto , aggiungere 20 μL per pozzetto di Reagente di proliferazione WST-1.
Condizioni di stoccaggio (soluzione di lavoro): Da 2 a 8 °C
Nota: Quando dopo lo scongelamento si osservassero precipitati o torbidità scaldare la soluzione a 37 °C per 2-10 minuti agitando per sciogliere i precipitati. Si sconsiglia la centrifugazione perché la concentrazione attiva diminuisce. Dopo essere stato sciolto il reagente WST-1 può essere usato senza limitazioni. Si prega di stoccare in questo modo:
Una volta scongelato conservare per quattro settimane a temperature da 2 a 8 °C, al riparo dalla luce. Tuttavia va notato che la soluzione potrebbe diventare viscosa. Nel caso, scaldare la soluzione a 37 °C per 2-10 minuti come sopracitato.
Stoccaggio a lungo termine
Per stoccare a lungo, aliquote di WST-1 si possono conservare in provette di plastica a temperature da -15 a -25 °C fino alla data di scadenza.
Altre note
Esclusivamente per ricerche life science. Non usare in procedure diagnostiche.
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N° Catalogo
Descrizione
Determinazione del prezzo
Codice della classe di stoccaggio
12 - Non Combustible Liquids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
nwg
Punto d’infiammabilità (°F)
No data available
Punto d’infiammabilità (°C)
No data available
Certificati d'analisi (COA)
Cerca il Certificati d'analisi (COA) digitando il numero di lotto/batch corrispondente. I numeri di lotto o di batch sono stampati sull'etichetta dei prodotti dopo la parola ‘Lotto’ o ‘Batch’.
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