MAB5266

Anti-Neurofilament H (200 kDa) Antibody

CHEMICON^®, mouse monoclonal, N52

• Sinonimo/i: Anti-CMT2CC, Anti-NFH
• Codice UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Proprietà

• Nome del prodotto: Anticorpo anti-neurofilamento di 200 kDa, clone N52, clone N52, Chemicon^®, from mouse
• Origine biologica: mouse
• Livello qualitativo: 100; 300
• Forma dell’anticorpo: purified immunoglobulin
• Tipo di anticorpo: primary antibodies
• Clone: N52, monoclonal
• Reattività contro le specie: human, mouse, monkey, rat, pig
• Produttore/marchio commerciale: Chemicon^®
• tecniche: immunohistochemistry: suitable; western blot: suitable
• Isotipo: IgG1
• N° accesso NCBI: NM_021076.2
• N° accesso UniProt: P12036
• Condizioni di spedizione: wet ice
• modifica post-traduzionali bersaglio: unmodified
• Informazioni sul gene: human ... NEFH(4744) ; mouse ... Nefh(380684) ; pig ... Nefh(100156492) ; rat ... Nefh(24587) ; rhesus monkey ... Nefh(717705)

Descrizione

Descrizione generale

I neurofilamenti fanno parte dei filamenti intermedi, sono componenti fondamentali del citoscheletro e rappresentano un elemento strutturale di supporto per l'assone. Sono i componenti fibrillari più numerosi dell'assone, essendo in media da 3 a 10 volte più frequenti dei microtubuli assonali. I neurofilamenti (10 nm di diam.) sono costituiti da tre protofibrille intrecciate, a loro volta composte da due complessi tetramerici di protofilamenti di proteine monomeriche. Le proteine della tripletta di neurofilamenti (68/70, 160 e 200 kDa) sono presenti sia nel sistema nervoso centrale che in quello periferico e sono generalmente neurone-specifici. La proteina NF-L di 68/70 kDa può autoassemblarsi in una struttura filamentosa, mentre le proteine NF-M di 160 kDa e NF-H di 200 kDa richiedono la presenza della proteina NF-L di 68/70 kDa per coassemblarsi. I neuromi, i ganglioneuromi, i gangliogliomi, i ganglioneuroblastomi e i neuroblastomi risultano positivi alla colorazione per i neurofilamenti. Sebbene siano di norma limitati ai neuroni, i neurofilamenti sono stati rilevati nei paragangliomi e nei feocromocitomi surrenalici ed extrasurrenalici. Anche i carcinoidi, i carcinomi neuroendocrini della pelle e i carcinomi a cellule a chicco di avena del polmone esprimono neurofilamenti. Per ulteriori informazioni sui neurofilamenti, consultare la tabella dei marcatori specifici per i tipi di cellule del sistema nervoso, disponibile online nella sezione Supporto tecnico di CHEMICON.

Specificità

MAB5266 reagisce con la catena H fosforilata e defosforilata del neurofilamento di 200 kDa (NF-H) in tessuti/estratti normali (Shaw, 1986). MAB5266 può essere utilizzato per rilevare le cellule di origine neuronale mediante immunoistochimica e Western blotting. È stato riscontrato che la reattività di MAB5266 con NF-H è bloccata nelle cellule che sovraesprimono cdk-5 (Guidato, 1996).

Immunogeno

Segmento carbossi-terminale della catena H suina defosforilata enzimaticamente.

Applicazioni

Categoria di ricerca
Neuroscienze

Questo anticorpo anti neurofilamento di 200 kDa, clone N52, è stato convalidato per l'uso in WB, IH per la rilevazione del neurofilamento di 200 kDa.

Sottocategoria di ricerca
Neurofilamenti & metabolismo neuronale

Marcatori neuronali & gliali

Western blotting: 5-10 μg/mL

Immunoistochimica: 5-10 μg/mL

Sarà cura dell′utente finale stabilire le diluizioni finali ottimali.

Immunoistochimica: L'anticorpo N52 reagisce con un frammento del braccio laterale di NF-200 situato all'estremità di KSP del dominio MPR e che contiene il sito consensuale di fosforilazione di cdk-5; tuttavia questa reattività è soppressa se il frammento NF-200 viene fosforilato con l′ausilio di cdk-5 {Guidato et al, 1996}. Pertanto, per ottenere la massima colorazione e reattività, Western blot compresi, si suggerisce di trattare i campioni con fosfatasi alcalina prima della colorazione anticorpale. Si suggerisce il seguente protocollo di trattamento:



Protocollo Preparazione delle soluzioni:

I. TBS: Tris-HCl, 0,1 mol/l; NaCl, 0,1 mol/l′ pH 8,0.

II. Miscelare la fosfatasi alcalina, 1 mg/ml con 1 mol/l di ZnSO4; 1 mol/l di MgCl2 e 1 mmol/l di PMSF; dissolvere in TBS.

N.B. È necessario dializzare la fosfatasi alcalina nella soluzione I prima dell'uso.

Procedura:

Le sezioni congelate provenienti da campioni di tessuto sottoposti a congelamento rapido vengono asciugate all'aria e successivamente fissate con acetone per 10 minuti a -20 °C. L'acetone in eccesso viene lasciato evaporare a temperatura ambiente. Incubare le sezioni nella soluzione II per 4 ore a +30 °C ed effettuare 3 lavaggi da 5 minuti ciascuno in TBS. Le sezioni per il controllo negativo sono incubate nella soluzione II senza fosfatasi alcalina. Ulteriore trattamento come segue:

- Coprire il preparato con 10-20 μl di soluzione anticorpale e incubare per 1 h in camera umida.

- Immergere il vetrino in TBS ed effettuare 3 lavaggi da 5 minuti ciascuno in TBS.

- Coprire il preparato con 10-20 μl di una soluzione di anticorpo anti-Ig di topo, marcato con isotiocianato di fluoresceina, e incubare in camera umida a 37 °C per 1 h.

- Lavare il vetrino in TBS 3 effettuando 3 lavaggi da 5 minuti ciascuno.

Stato fisico

Formato: purificato

Immunoglobulina purificata (cromatografia a scambio ionico). Liquido in tampone fosfato 0,02 M, 0,25 M di NaCl con lo 0,1% di azoturo di sodio, pH 7,6

Stoccaggio e stabilità

Conservare a 2-8 °C in aliquote non diluite per un massimo di sei mesi. Evitare ripetuti cicli di congelamento e scongelamento.

Altre note

Concentrazione: per la concentrazione specifica del lotto, fare riferimento al Certificato di Analisi.

Note legali

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 10 - Combustible liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 2
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable