T9935

Trypsin aus Rinderpankreas

essentially salt-free, lyophilized powder, ≥9,000 BAEE units/mg protein, BioReagent, suitable for cell culture

• Synonym(e): Serine Protease 1
• CAS-Nummer: 9002-07-7
• EC-Nummer: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-650-8
• MDL-Nummer: MFCD00082094
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Produktlinie: BioReagent
• Qualitätsniveau: 200
• Form: essentially salt-free, lyophilized powder
• Spezifische Aktivität: ≥9,000 BAEE units/mg protein
• Mol-Gew.: 23.8 kDa
• Zusammensetzung: protein, ≥80%
• Methode(n): cell culture | mammalian: suitable
• Löslichkeit: hydrochloric acid: soluble 1 mM
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Anwendung

Für den Trypsinverdau von Peptiden ein Verhältnis von ca. 1:100 bis 1:20 (Trypsin:Peptid) verwenden. Die typische Verwendung für dieses Produkt besteht im Entfernen von adhärenten Zellen von einer Kulturoberfläche. Die zum Ablösen von Zellen von ihrem Substrat erforderliche Trypsinkonzentration hängt in erster Linie vom Zelltyp und dem Alter der Kultur ab. Trypsine werden auch für die Resuspendierung von Zellen während der Zellkultur, in der Proteomikforschung für den Verdau von Proteinen und in verschiedenen In-Gel-Verdaus verwendet. Weitere Anwendungsbereiche sind u. a. die Beurteilung der Kristallisierung mit membranbasierten Methoden und eine Studie zur Feststellung, ob Proteinfaltungsraten und Proteinausbeuten durch das Vorhandensein von sog. „kinetischen Fallen“ begrenzt werden können.

Trypsin aus Rinderpankreas wird für den enzymatischen Verdau von Bandscheibenzellen (Nucleus pulposus, NP) während der Isolierung humaner NP-Zellen eingesetzt. Es wird außerdem für die Aufreinigung von Zellen als Immunopanning-Reagens eingesetzt.

Biochem./physiol. Wirkung

Trypsin spaltet Peptide auf der C-terminalen Seite von Lysin- und Argininrückständen. Die Hydrolyse dieser Reaktion wird verlangsamt, wenn sich auf einer der Seiten der Spaltstelle ein Säurerest befindet, und die Hydrolyse wird beendet, wenn sich auf der Carboxylseite der Spaltstelle ein Prolinrest befindet. Der optimale pH-Wert für die Trypsinaktivität liegt zwischen 7 und 9. Trypsin kann auch zum Spalten von Ester und Amidbindungen von synthetischen Derivaten von Aminosäuren eingesetzt werden. EDTA wird Trypsinlösungen als Chelatbildner zugegeben, der Calcium- und Magnesiumionen neutralisiert, welche die Peptidbindungen verdecken, auf die sich das Trypsin auswirkt. Durch das Entfernen dieser Ionen wird die enzymatische Aktivität verstärkt.

Serinprotease-Inhibitoren, u. a. DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF und Aprotinin, hemmen Trypsin.

Komponenten

Trypsin besteht aus einem einsträngigen Polypeptid aus 223 Aminosäureresten und wird durch Entfernung des N-terminalen Hexapeptids von Trypsinogen produziert, das an der Lys-Ile-Peptidbindung abgespalten wird. Die Aminosäuresequenz ist durch 6 Disulfidbrücken vernetzt. Dies ist die native Form von Trypsin, Beta-Trypsin. Beta-Trypsin kann durch Autolyse am Lys-Ser-Rest aufgespalten und so in Alpha-Trypsin umgewandelt werden. Trypsin gehört zur Familie der Serinproteasen.

Vorsicht

Lösungen in 1 mM HCl sind in Aliquoten bei einer Temperatur von -20 °C ein Jahr haltbar. Das vorhandene Ca²⁺ reduziert zudem die Selbstautolyse von Trypsin und erhält dessen Stabilität in Lösung. Trypsin behält auch den Großteil seiner Aktivität in 2,0 M Harnstoff, 2,0 M Guanidin HCl oder 0,1 % (w/v) SDS bei.

Einheitendefinition

Eine BAEE-Einheit erzeugt unter Verwendung von BAEE als Substrat ein A₂₅₃ von 0,001 pro Minute bei einem pH-Wert von 7,6 und einer Temperatur von 25 °C.

Angaben zur Herstellung

Dieses Produkt stammt aus dem Pankreas und wird aus Neuseeland bezogen. Es ist in 1 mM HCl bei 1 mg/mL löslich.
Bei Anwendungen, in denen EDTA verwendet wird, sollte Trypsin in einer gepufferten Salzlösung ohne Ca²⁺ oder Mg²⁺ aufgelöst werden.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07,GHS08
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H315 - H319 - H334 - H335
• P-Sätze: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Gefahreneinstufungen: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Zielorgane: Respiratory system
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Persönliche Schutzausrüstung: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves