AMPD1

DNAse I

Amplification Grade

• Synonym(e): Desoxyribonuclease I
• EC-Nummer: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 200
• Form: liquid
• Konzentration: 1 unit/μL
• Methode(n): RT-PCR: suitable
• Farbe: colorless
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Desoxyribonuclease I (DNase I) ist eine aus dem Rinderpankreas isolierte Endonuklease, die doppel- und einzelsträngige DNA zu Oligo- und Mononukleotiden verdaut. DNase I in Amplifikationsqualität wurde zwecks Eliminierung der RNase-Aktivität aufgereinigt und ist für das Entfernen von DNA aus RNA-Präparationen vor empfindlichen Anwendungen geeignet, wie beispielsweise bei der RT-PCR (Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion).

DNase I verdaut doppel- und einzelsträngige DNA zu Oligo- und Mononukleotiden. Mit dem gelieferten Reaktionspuffer wird DNA in einem 15-minütigen Verdau bei Raumtemperatur aus RNA-Präparationen entfernt. Die DNase wird dann durch Erhitzen mit der Stopplösung inaktiviert. Das Erhitzen trägt auch zur Denaturierung von Haarnadeln in der RNA bei und die RNA kann somit direkt in der reversen Transkription eingesetzt werden.

Keine der gegenwärtigen RNA-Isolierungsverfahren sind in der Lage, 100 % der DNA zu entfernen. Viele kommerzielle DNase-I-Formulierungen sind mit Restmengen an RNasen kontaminiert. Die Verunreinigung mit RNase kann wertvolle RNA-Proben vor der reversen Transkription zerstören oder abbauen. Durch Laborvergleiche konnte nachgewiesen werden, dass die DNase I in Amplifikationsqualität von Sigma eine schwächere RNase-Aktivität als Produkte mehrerer anderer führenden Lieferanten im Bereich der Molekularbiologie aufweist.

Anwendung

DNase I in Amplifikationsqualität wird wie folgt verwendet:

• Für den Aufschluss von DNA während der Isolierung und Aufreinigung von RNA. Die aufgereinigte RNA kann zur Synthese von cDNA mittels RNA-Reverse-Transkriptase verwendet werden.
• Zum Hydrolysieren von Komponenten der extrazellulären Matrix (EZM) und zum Verbessern der Fotosensibilisatorpenetration in den Biofilm, um die Wirksamkeit der antimikrobiellen fotodynamischen Therapie (aPDT) auf Candida albicans-Biofilme zu bestimmen
• Zum Entfernen der kontaminierenden DNA aus Gesamt-RNA, die aus Rinderblutproben extrahiert wurde

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Für die Entfernung von DNA aus RNA geeignet
• Minimale RNase-Aktivität verfügbar
• Optimierter 10x-Reaktionspuffer und Stopplösung zur vollständigen Inaktivierung von DNase I

Eignung

Zum Entfernen von DNA aus RNA-Präparationen geeignet.

Einheitendefinition

Eine Einheit verdaut in 10 min bei 37 °C 1 μg Plasmid-DNA vollständig zu Oligonukleotiden.

Rechtliche Hinweise

Der Erwerb dieses Produkts umfasst eine eingeschränkte Lizenz zur ausschließlichen Verwendung in einem Polymerase-Kettenreaktionsverfahren (PCR) für Forschungszwecke und zur gemeinsamen Verwendung mit einem Thermocycler, dessen Einsatz im automatisierten PCR-Prozess durch eine vorausbezahlte Lizenzgebühr abgedeckt ist, entweder durch Zahlung an Applied Biosystems oder als Direktkauf, und der demnach ein autorisierter Thermocycler ist.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable