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Ribonuklease H (RNase H)

from Escherichia coli H 560 pol A1

• Synonym(e): RNase H
• UNSPSC-Code: 12352204

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Escherichia coli ( H 560 pol A1)
• Qualitätsniveau: 100
• Assay: 100%
• Form: solution
• Spezifische Aktivität: ~40000 units/mg protein
• Verpackung: pkg of 100 U
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): cDNA synthesis: suitable
• Farbe: colorless
• Optimaler pH-Wert: 7.5-9.1
• Löslichkeit: water: miscible
• Eignung: suitable for molecular biology
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_414750.1
• Anwendung(en): life science and biopharma
• Fremdaktivität: RNase, none detected (up to 10 U with MS- II- RNA); endonuclease ~10 units, none detected (using lambda-DNA); nicking activity 10 units, none detected
• Versandbedingung: dry ice
• Lagertemp.: −20°C (−15°C to −25°C)
• Angaben zum Gen: Escherichia coli ... rnhA(946955)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Ribonuklease H (RNase H) ist eine unspezifische, im Nukleus und Zytoplasma lokalisierte Endoribonuklease. Sie ist ubiquitär anzutreffen und unter vielen Organismen, darunter Viren und Menschen, weit verbreitet.

Unspezifische Endoribonuklease, die RNA spezifisch zu RNA:DNA-Hybriden spaltet. Für ihre Aktivität sind mindestens vier kontinuierliche Basenpaare (RNA:DNA) erforderlich. RNase H spaltet RNA zur Freisetzung von 5′-Oligoribonukleotiden.

Quelle: E. coli H560 pol A1
Lagerpuffer: 25 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM Dithiothreitol, 0,1 mM EDTA, 50 % Glycerin (v/v), pH 8,0 (+4 °C)
Volumenaktivität: 1 x 103 U/mL nach Hillenbrand & Staudenbauer getestet.

Anwendung

Ribonuklease H (RNase H) wird für Folgendes verwendet:

• In-vivo-Initiierung der DNA-Synthese mit RNA-Priming
• Beseitigung von mRNA während der Zweitstrang-cDNA-Synthese
• Stellenspezifische Spaltung von RNA
• Detektion von RNA:DNA-Regionen in doppelsträngiger DNA natürlicher Herkunft
• Entfernung der Poly-(A)-Sequenzen von mRNA bei Vorhandensein von Oligo (dT)
• RNA-Extraktion und quantitative Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR)

Biochem./physiol. Wirkung

Ribonuklease H (RNase H) spaltet RNA spezifisch zu RNA:DNA-Hybriden. Für ihre Aktivität sind mindestens vier kontinuierliche Basenpaare (RNA:DNA) erforderlich. RNase H spaltet RNA zur Freisetzung von 5′-Oligoribonukleotiden. RNase H steht mit der Nukleinsäure-Immunität im Zusammenhang. Die Verwendung von RNase H zum Abbau von mRNA resultiert in einer 80-prozentigen mRNA-Depletion und Proteinexpression. RNase H erkennt das Startcodon und die 3′- und 5′-untranslatierten Regionen. Dieses Enzym ist an der DNA-Replikation beteiligt.

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Beseitigt potenzielle Quellen von PCR-Fehlern.
• Verbessert die Zugänglichkeit von Primern während einer anschließenden PCR.

Qualität

Abwesenheit von Endonukleasen, Nicking-Aktivitäten und Ribonukleasen.

Einheitendefinition

RNase H wird nach Hillenbrand und Staudenbauer getestet. Eine Einheit von RNase H ist die Enzymmenge, die innerhalb von 20 Minuten bei +37 °C unter den angegebenen Assay-Bedingungen 1 nmol in Säure lösliche Ribonukleotide aus[³H] poly(A) x poly(dT) erzeugt.

Volumenaktivität: Ca. 1 U/μL

Angaben zur Herstellung

Aktivator: Das Enzym hat bei Vorhandensein von SH-Reagenzien seine maximale Aktivität.

Lagerung und Haltbarkeit

Bei -15 bis -25 °C (ungeöffnet) aufbewahren

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet. Durch die Verwendung von RNase H nach der cDNA-Synthesestufe kann die Empfindlichkeit eines zweistufigen RT-PCR-Assays erhöht werden.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash