TRANSRTRO

Transcriptase inverse Transcriptor

• Code UNSPSC : 41106313
• Nomenclature NACRES : NA.21

Propriétés

• Produit recombinant: expressed in E. coli
• Niveau de qualité: 100
• Pureté: ≥90% (SDS-PAGE)
• Forme: liquid
• Utilisation: sufficient for 25 reactions; sufficient for 50 reactions; sufficient for 500 reactions
• Activité spécifique: 0.05 U/mg
• Caractéristiques: dNTPs included: no; hotstart: no
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Conditionnement: pkg of 200 reactions (03531287001); pkg of 25 reactions (03531317001); pkg of 50 reactions (03531295001)
• Technique(s): RT-PCR: suitable; RT-qPCR: suitable
• Couleur: colorless
• pH: 7.2
• Solubilité: water: miscible
• Adéquation: suitable for molecular biology
• Numéro d'accès UniProt: Q9JG39
• Application(s): genomic analysis; life science and biopharma
• Méthode de détection: probe-based
• Activité étrangère: DNase activity, none detected; Nicking activity, none detected; RNase activity, none detected
• Température de stockage: −20°C (−15°C to −25°C)

Description

Description générale

La transcriptase inverse (RT) est une enzyme clé dans les rétrovirus tels que le virus de l'immunodéficience humaine de type 1 (VIH-1). La RT du VIH-1 est constituée de deux sous-unités de 66 kDa et 51 kDa (p66 et p5l). Un rétrovirus endogène humain de la famille des HERV-K code une enzyme transcriptase inverse (RT).

Transcriptase inverse recombinante pour la transcription fiable de fragments d'ARN mesurant jusqu'à 14 kb utilisée en RT-PCR en une étape sur des thermocycleurs et des appareils de PCR en temps réel.

Application

La transcriptase inverse Transcriptor est conçue pour transcrire de l'ARN (ARNm, ARN total, ARN viral et ARN transcrit in vitro) de diverses sources à l'aide de thermocycleurs et d'appareils de PCR en temps réel (appareils LightCycler^®, par exemple) pour les besoins suivants :

• synthèse du premier brin d'ADNc utilisable dans des réactions d'amplification ultérieures
• RT-PCR de matrices d'ARN riches en GC
• marquage à la Cy3, à la Cy5, à la DIG, à la biotine et à l'aminoallyle durant la synthèse d'ADNc
• restauration et clonage des extrémités 5′ et 3′ de l'ARNm par RACE
• création de banques d'ADNc contenant de longues séquences d'insertion
• séquençage de l'ADN par la méthode de Sanger
• séquençage de l'ARN
• marquage de l'extrémité 3′ de fragments d'ADN
• production de sondes simple brin pour empreintes génomiques
• transcription inverse de l'ARN de la protéine E6 du papillomavirus humain, de tissu cortical et striatal, de biopsies musculaires d'échantillons de dystrophie musculaire pseudohypertrophique de Becker et de la structure tige-boucle de micro-ARN d'ovocytes et de cellules endothéliales microvasculaires de cerveau humain (hCMVEC)

Actions biochimiques/physiologiques

La transcriptase inverse du virus de l'immunodéficience humaine de type 1 (RT VIH-1) est essentielle à la conversion catalytique d'un ADN viral simple brin en un ADN linéaire double brin capable de s'intégrer dans les chromosomes de la cellule hôte.

Caractéristiques et avantages

• Haute sensibilité dans la RT-PCR en deux étapes

La transcriptase inverse Transcriptor s'utilise dans des thermocycleurs et des appareils de PCR en temps réel classiques tels que les appareils LightCycler^®.

• Plus grand nombre de transcrits complets (jusqu'à 14 kb)

Vous pouvez créer des banques d'ADNc contenant de longues séquences d'insertion.

• Transcription inverse de matrices difficiles

L'enzyme est active à haute température, ce qui permet de dénaturer la structure secondaire de l'ARN (matrices d'ARN riche en GC, par exemple) tout en bénéficiant de conditions réactionnelles optimales.

• Bon marquage de l'ADNc

Des nucléotides marqués à la cyanine 3 (Cy3), à la cyanine 5 (Cy5), à la digoxigénine (DIG), à la biotine ou à l'aminoallyle sont incorporés durant la synthèse de l'ADNc.

Composants

• Transcriptase inverse Transcriptor dans un tampon de conservation
• Tampon de RT Transcriptor, concentré 5×

Qualité

La fonction de chaque lot de transcriptase inverse Transcriptor est systématiquement contrôlée par RT-PCR :

• avec un thermocycleur classique pour détecter un fragment de 10 kb du gène de la dystrophine humaine, en utilisant comme matériel de départ de l'ARN total de muscle squelettique humain ;
• avec l'appareil LightCycler^® pour détecter 5 × 10² à 5 × 10⁶ copies d'ARN de PBGD humaine transcrit in vitro. Les résultats sont définis par une intensité de fluorescence et des points d'intersection fixes.

Notes préparatoires

Activité volumique : 20 U/μl
Transcription d'ARN cibles longs, rares ou difficiles
La transcriptase inverse Transcriptor est recommandée pour la RT-PCR des cibles suivantes :

• cibles longues, parce qu'elle est capable de transcrire des matrices d'ARN mesurant jusqu'à 14 kb ;
• cibles rares, en raison de sa haute sensibilité ;
• cibles riches en GC, car elle peut être utilisée à haute température (jusqu'à +65 °C) pour éliminer les problèmes liés aux structures secondaires très élaborées.

Marquage dans de nombreuses applications
La transcriptase inverse Transcriptor est également recommandée pour la préparation d'ADNc marqué puisqu'elle fonctionne avec une grande diversité de nucléotides modifiés (dont les dNTP marqués à la Cy3, à la Cy5, à la DIG, à la biotine ou à l'aminoallyle).
Conditions de réaction
La RT Transcriptor fonctionne avec des matrices d'ARNsb et d'ADNsb et nécessite une amorce pour la transcription.

Stockage et stabilité

Éviter les congélations et décongélations répétées.

Autres remarques

Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations légales

LightCycler is a registered trademark of Roche

Informations sur la sécurité

• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash