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Kit Transcriptor One-Step RT-PCR

sufficient for 50 reactions, sufficient for 150 reactions, suitable for RT-qPCR, suitable for RT-PCR, hotstart

• Code UNSPSC : 41106313
• Nomenclature NACRES : NA.55

Propriétés

• Utilisation: sufficient for 150 reactions; sufficient for 50 reactions
• Niveau de qualité: 100
• Caractéristiques: hotstart
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Conditionnement: pkg of 150 reactions (04655885001); pkg of 50 reactions (04655877001)
• Technique(s): RT-PCR: suitable; RT-qPCR: suitable
• Entrée: purified RNA
• Méthode de détection: probe-based

Description

Description générale

La RT-PCR en une étape est une technique très sensible permettant de déterminer la présence ou l'absence de matrices d'ARN, ou de quantifier les niveaux d'expression grâce à une analyse qualitative, semi-quantitative ou quantitative des niveaux de transcription de l'ARN (pour la quantification au niveau d'un virus, par exemple). Cette méthode de RT-PCR facilite également l'amplification des messages rares pour le clonage. Le format en une étape est pratique, réduit la variabilité d'une réaction à l'autre et évite les contaminations en minimisant les étapes de manipulation manuelle.
Le Kit Transcriptor One-Step RT-PCR procure les avantages exceptionnels de la transcriptase inverse Transcriptor, ainsi que les avantages d'un format de RT-PCR en une étape à démarrage à chaud.

Le Kit Transcriptor One-Step RT-PCR fournit, dans un format pratique à utiliser, tous les éléments nécessaires à une RT-PCR en une étape (hormis les amorces et la matrice). Le conditionnement pour 50 réactions comprend également 10 réactions de contrôle (mélange avec ARN de contrôle et amorce de contrôle).
Le mélange enzymatique pour RT-PCR contenu dans le kit comprend quatre enzymes différentes : la transcriptase inverse Transcriptor permet de réaliser une transcriptase inverse sensible et robuste avec un bon rendement ; l'inhibiteur de RNases Protector, 100 % actif à haute température, assure une protection maximale de la matrice durant la transcription inverse et le système Expand, mélange d'ADN Taq polymérase et d'une polymérase de correction d'épreuve, réduit autant que possible le risque de mutations, pour une PCR de haute fidélité et à haut rendement.
Le tampon de réaction optimisé pour RT-PCR contient des dNTP de grande qualité et procure les performances globales supérieures d'un système à démarrage à chaud. Le constituant à démarrage à chaud unique du tampon se lie aux amorces et les séquestre à basse température pour les empêcher de se fixer sur des sites non spécifiques. Un autre constituant fixe le magnésium selon un mode d'action dépendant de la température, pour éviter toute synthèse d'ADN non maîtrisée. La nouvelle formulation du tampon est efficace aussi bien durant la transcription inverse que durant la PCR, pour une spécificité et une sensibilité accrues.
L'association du tampon de réaction optimisé et du mélange d'enzymes permet d'assurer une transcription efficace des matrices difficiles présentant une structure secondaire complexe et une forte teneur en GC, sans avoir besoin d'augmenter la température de réaction.

Produit destiné à la RT-PCR en une étape à démarrage à chaud, utilisant un mélange de transcriptase inverse Transcriptor, d'inhibiteur de RNases Protector et du système Expand, avec un tampon à démarrage à chaud innovant (brevets en instance).

Application

Le Kit Transcriptor One-Step RT-PCR est conçu pour une analyse RT-PCR en point final spécifique, rapide et sensible de l'ARN (ARN total, ARNm, ARN transcrit in vitro ou ARN viral) à l'aide d'amorces spécifiques d'un gène.
Avec son tampon de réaction innovant, le kit combine une transcription inverse sensible à haut rendement et les performances accrues d'un système à démarrage à chaud, pour une amplification de haute fidélité et à haut rendement de diverses matrices, y compris l'ARN riche en GC.
Le kit propose une méthode de RT-PCR en une étape pratique et très sensible pour générer des produits de transcription allant jusqu'à 6,5 kb destinés aux applications telles que :

• L'analyse qualitative, semi-quantitative ou quantitative des taux de transcription de l'ARN.
• La détermination de la présence ou de l'absence de matrices d'ARN.
• La quantification de l'expression génique via l'analyse de l'ARN (pour la quantification au niveau d'un virus, par exemple).
• Le clonage des ARN jusqu'à 6,5 kb.

Le format en une étape est pratique, réduit la variabilité d'une réaction à l'autre et évite les contaminations en minimisant les étapes de manipulation manuelle.

Le kit de RT-PCR en une étape Transcriptor a été utilisé pour l'amplification des éléments suivants :

• fragments du virus de l'hépatite C (VHC)
• région CH3 de chaînes lourdes et région polyA de chaînes légères
• virus de la leucémie murine (MLV)

Caractéristiques et avantages

• Bénéficiez d'une sensibilité et d'un rendement élevés sur une large plage d'amplification :

Détectez l'ARN total à partir de 1 fg.

• Profitez d'une grande spécificité et réduisez la quantité des dimères d'amorces :

Comptez sur d'excellentes performances grâce au tampon à démarrage à chaud exclusif contenu dans le kit (brevets en instance).

• Produisez de longs fragments :

Générez des produits de transcription allant jusqu'à 6,5 kb.

• Transcrivez diverses matrices, même les plus difficiles (de l'ARN riche en GC par exemple) :

Venez à bout des structures secondaires complexes grâce à l'association de la transcriptase inverse Transcriptor thermostable et d'un tampon optimisé.

• Gagnez du temps et améliorez vos résultats avec un kit pratique :

Réduisez au minimum les étapes de pipetage et évitez les contaminations en utilisant un mélange enzymatique prémixé et un tampon optimisé comprenant des dNTP de qualité PCR et des constituants à démarrage à chaud.

• Protégez vos échantillons d'ARN :

Préservez votre ARN de la dégradation grâce aux RNases de l'inhibiteur de RNases Protector thermostable, qui est fourni dans le kit et qui fonctionne durant la RT-PCR en une étape quand d'autres inhibiteurs de RNases ne marchent pas.

• Ayez davantage confiance en vos résultats :

Utilisez les réactions de contrôle fournies avec le kit pour contrôler les performances.

Composants

• Mélange d'enzymes pour RT-PCR contenant la transcriptase inverse Transcriptor, l'inhibiteur de RNases Protector et le système Expand
• Tampon de réaction pour RT-PCR contenant des éléments de médiation pour un démarrage à chaud ainsi que des dNTP – concentré 5x
• Eau de qualité PCR
• ARN de contrôle – ARN du VHA, produit de transcription in vitro *
• Mélange d'amorces de contrôle pour ARN de VHA (amorces directe et inverse) *

* Uniquement inclus dans le conditionnement pour 50 réactions.

Qualité

La fonction de chaque lot du Kit Transcriptor One-Step RT-PCR est contrôlée par RT-PCR. Une RT-PCR est réalisée avec 1000 copies de produit de transcription in vitro d'ARN du VHA (également fourni avec la réf. 04 655 877 001). La mise en place de la réaction de contrôle et la RT-PCR qui s'ensuit avec des amorces correspondant à un fragment d'ARN de VHA de 246 pb sont réalisées selon le protocole de RT-PCR standard (transcriptase inverse à +50 °C pendant 30 minutes) figurant sur la notice de l'emballage. Avec 1000 copies, et après une électrophorèse sur gel d'agarose et une coloration au bromure d'éthidium, on obtient une bande clairement visible.
La RT-PCR est également appliquée à une série de dilutions d'ARN total de foie humain (10 ng, 1 ng et 0,1 ng). Une RT-PCR avec des amorces spécifiques d'un fragment de 2,5 kb d'ApoB est effectuée selon le protocole de RT-PCR standard (transcriptase inverse à +50 °C pendant 30 minutes) figurant sur la notice de l'emballage. Avec 1 ng d'ARN et après une électrophorèse sur gel d'agarose et une coloration au bromure d'éthidium, on obtient une bande clairement visible.

Autres remarques

Présentation des transcriptases inverses

Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations sur la sécurité

• Mentions de danger: H412
• Conseils de prudence: P273 - P501
• Classification des risques: Aquatic Chronic 3
• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 2
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash