Reagentes e substratos para imunodetecção

Recursos de produtos relacionados

Protocolo: Protein Blotting Handbook
Brochura: Rethink Western Blotting
Artigo: Western Blotting Protocol (Immunoblotting Protocol)

Reagentes bloqueadores

O bloqueio de sítios de membrana não ligados impede a ligação não específica de anticorpos que pode causar altos níveis de interferência. O leite comum, a gelatina e outros bloqueadores à base de proteínas são eficazes em muitas aplicações de blot, mas podem reduzir a sensibilidade ou a detecção mascarando o sinal ou interferindo na detecção de alvos proteicos específicos. Os reagentes de eliminação de interferências Immobilon^®Block incluem tampões isentos de proteínas e prontos para uso, otimizados para reduzir os níveis de interferência na detecção por quimioluminescência, fluorescência ou com fosfoproteínas.

Conjugados de estreptavidina e anticorpo secundário

Os métodos modernos de imunodetecção baseiam-se na detecção enzimática usando estreptavidina ou anticorpos secundários ligados de modo covalente a enzimas, como a peroxidase de rábano (HRP) ou fosfatase alcalina (FA). A enzima conjugada catalisa a degradação de substratos específicos, gerando um sinal. Uma variedade de conjugados de estreptavidina, proteína A, proteína G e anticorpos secundários estão disponíveis para western blot. Também oferecemos uma ampla variedade de substratos para HRP e FA para detecção quimioluminescente, cromogênica e quimiofluorescente em western blot.

SUBSTRATOS QUIMIOLUMINESCENTES PARA WESTERN BLOT

Os substratos para HRP Immobilon^® para detecção quimioluminescente aumentam a sensibilidade de blots mais quantitativos, reduzindo os custos e permitindo diminuir a concentração de anticorpos usados para detecção. Escolha dentre um portfólio de substratos Immobilon® com graus de sensibilidade variados em formatos prontos para uso convenientes ou de dois componentes para otimizar a detecção para a sua aplicação de western blot.

• Os substratos quimioluminescentes Immobilon^® Classico, Crescendo e Forte compreendem uma família de reagentes pré-misturados e prontos para uso para detecção à base de peroxidase, oferecidos com diversos graus de sensibilidade para fornecer razões sinal-ruído ideais ao longo de um espectro de concentrações da proteína-alvo. Limites de detecção:
  • Immobilon^® Classico: ~ 6 pg de proteína-alvo
  • Immobilon^® Crescendo: ~ 1-3 pg de proteína-alvo
  • Immobilon^® Forte: ~ 400 fg de proteína-alvo
    
• Os substratos de HRP para uso em quimioluminescência aprimorada (ECL) Ultra e Western quimioluminescente Immobilon^® conferem sensibilidade excepcional e longa duração de sinal em formatos padrão de dois componentes. Essas formulações possibilitam o uso de soluções de anticorpo primário mais diluídas para detecção por imunoblotting. Limites de detecção:
  • Substrato de HRP para western blot Immobilon^® ~ 400 & de proteína-alvo
  • Substrato Immobilon^® para ECL Ultra: intervalo menor de fentogramas

Os reagentes para detecção Cytiva™ Amersham™ ECL (quimioluminescência aprimorada) usam detecção de HRP à base de luminol aprimorada, com diferentes formulações disponíveis para abranger diferentes necessidades de aplicação de western blot.

• Os reagentes de detecção para western blot Cytiva Amersham™ ECL são recomendados para aplicações confirmatórias de western blot.
• Os reagentes de detecção para western blot Cytiva Amersham™ ECL Prime possibilitam a detecção de proteínas muito e pouco abundantes no mesmo blot.
• Os reagentes de detecção para western blot Cytiva Amersham™ ECL Select oferecem alta sensibilidade mesmo quando usam anticorpos primários e secundários diluídos.
• O reagente de detecção para western blot Cytiva Amersham™ ECL Start foi desenvolvido para detecção quimioluminescente de proteínas de média e alta expressão.

SUBSTRATOS CROMOGÊNICOS PARA WESTERN BLOT

A detecção cromogênica utiliza uma enzima conjugada com peroxidase (p. ex., HRP) ou fosfatase alcalina (FA) para catalisar uma reação que resulta na deposição de um precipitado colorido insolúvel para detecção. Os nossos substratos cromogênicos para western blot estão disponíveis nas formas de solução, pó e comprimido para fornecer opções flexíveis de armazenamento e uso.

• Os comprimidos SIGMAFAST™ DAB (substrato para HRP cromogênico) são compostos de um substrato de precipitação colorimétrico que produz uma cor marrom após a reação com peroxidase de rábano e podem ser dissolvidos em água para preparar uma solução tamponada pronta para uso para detecção em blots.
• Os reagentes Single Reagent BCIP/NBT (azul/roxo) e BCIP/TNBT (azul/marrom) são substratos colorimétricos altamente sensíveis para fosfatase alcalina.
• O TMB Enhanced One Component HRP Membrane Substrate (substrato para HRP cromogênico) é um substrato colorimétrico de um único componente que gera um produto azul escuro.

Intensificadores de sinal

• O intensificador de sinal Immobilon^® foi projetado para uso em aplicações de western blot com baixa intensidade de sinal. O aprimoramento da reação anticorpo-antígeno pode aumentar a intensidade do sinal de 2 a 10 vezes. O intensificador de sinal Immobilon^® é compatível com membranas de PVDF e de nitrocelulose e pode ser usado com métodos de detecção cromogênicos, quimioluminescentes e fluorescentes.
• O kit intensificador de imunorreações SignalBoost™ é projetado para melhorar o sinal quimioluminescente ou colorimétrico do alvo em membranas de nitrocelulose ou PVDF

Reagentes e kits para remoção e readição

Os reagentes para remoção e readição são especialmente formulados para remover anticorpos de western blot de forma rápida e eficaz sem afetar substancialmente as proteínas imobilizadas.